細(xì)胞凋亡是維持機體內(nèi)環(huán)境平衡、排出機體不必要、有害細(xì)胞等的過程,又稱為程序性死亡。哺乳動物卵巢卵泡發(fā)育過程中,卵巢上所有的卵泡都要經(jīng)歷退化、閉鎖的過程,只有少數(shù)卵泡發(fā)育成熟。顆粒細(xì)胞在卵泡發(fā)育過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用,并且與卵泡閉鎖等過程密切相關(guān)。Kisspeptins（Kp）是由KiSS-1基因編碼的肽類激素,通過G蛋白偶聯(lián)受體（G protein-couple receptor-54）GPR54發(fā)揮作用。Kp通過調(diào)節(jié)下丘腦GnRH分泌,影響促卵泡素和促黃體素的分泌,在下丘腦、肝、胰、胎盤、卵巢等組織中有表達(dá)。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),Kp在牛卵巢顆粒細(xì)胞上有表達(dá),并能促進(jìn)牛顆粒細(xì)胞凋亡,但其調(diào)控機制尚不清楚。本試驗選用100 nM的kp-10處理牛顆粒細(xì)胞24 h,利用miRNA-mRNA測序關(guān)聯(lián)分析技術(shù)篩選參與kisspeptin促進(jìn)牛顆粒細(xì)胞凋亡的miRNA及其靶基因。根據(jù)miRNA-mRNA聯(lián)合分析結(jié)果,獲得114個差異表達(dá)的mRNAs,61個差異表達(dá)的miRNAs,2438個GO富集功能差異的miRNA-mRNA,9個差異顯著的KEGG信號通路。熒光定量PCR法驗證部分差異表達(dá)的mi... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：140 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

miRNA生物學(xué)合成過程

miRNA 比轉(zhuǎn)錄因子更容易，可以避免并發(fā)癥。將 miRNA 插入發(fā)育網(wǎng)絡(luò)過程，比機體自身轉(zhuǎn)錄功更易發(fā)揮相應(yīng)功能。在植物中，與動物相比，miRNAs 的表達(dá)未得到解析[68]。植物中的 miRNA 主要是通過第一種方式，是靶基因全部降解，發(fā)揮生物學(xué)功能。在植物中，miRNA 的年齡與其表達(dá)水平之間的相關(guān)性低于動物。在動物上，主要是通過第二種方式，抑制靶基因的表達(dá)，通過 miRNA 與靶基因3’-UTR 端的不完全配對，達(dá)到抑制表達(dá)的目的。

miRNA 的表達(dá)水平可以提高，其組織特異性會有所減弱，便于 miRNA 與其靶基因相互結(jié)合。Mutz[91]等研究發(fā)現(xiàn)這個模型顯然是一個復(fù)雜過程的簡化圖，但預(yù)測了可檢驗的 miRNAs，最近進(jìn)化的 miRNAs 可以在特定的時空域中弱表達(dá)，人類 miRNAs表達(dá)比古代保守的 miRNAs 更低。Salem[92]等通過高通量測序方法發(fā)現(xiàn)人與黑猩猩大腦 miRNA 的表達(dá)是一致的，與預(yù)測結(jié)果相符。這個模型中通過高通量方法，測序得到數(shù)千個 miRNAs，這表明，其中一些是隨機轉(zhuǎn)錄發(fā)夾，雖然這可能不是一個重要的生物學(xué)作用，但不排除這種可能性，將來可以獲得這樣的功能。Sempere[70]等在動物新的組織類型和器官的獲得新 miRNA，這與之前建立的模型結(jié)果一致。針對特定的序列主題，進(jìn)化出一個新的 miRNA 基因，但轉(zhuǎn)錄因子不一樣，因為蛋白質(zhì)的序列專一性是其氨基酸序列的一個復(fù)雜功能。因此，如果一個轉(zhuǎn)錄因子獲得一個新的表達(dá)域，預(yù)計它能調(diào)控原來表達(dá)范圍內(nèi)的基因所導(dǎo)致的有害影響。

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本文編號：3106312