豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）是嚴(yán)重危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重要病原,其具有快速演化和變異、拮抗宿主天然免疫等特性,這給PRRSV感染及其所致臨床疾病的預(yù)防與控制造成巨大困難。因此,研究宿主天然抗病毒分子對PRRSV的抗病毒活性和PRRSV拮抗天然抗病毒分子的機(jī)制,對于理解PRRSV逃逸宿主天然免疫的機(jī)制以及尋找抗PRRSV天然分子具有重要的理論和實(shí)踐意義。本研究分析干擾素調(diào)節(jié)因子1（IRF1）、膽固醇25羥化酶（CH25H）和25-羥基膽固醇（25HC）對PRRSV的抗病毒活性及其機(jī)制,并探討PRRSV拮抗其抗病毒功能的分子機(jī)制,以期為闡釋PRRSV拮抗宿主天然免疫的機(jī)制和PRRSV防控新策略提供科學(xué)依據(jù)。采用慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)豬IRF1基因的MARC-145細(xì)胞,分析過表達(dá)IRF1對PRRSV增殖的影響,結(jié)果顯示,過表達(dá)IRF1可顯著降低PRRSV的增殖滴度,表明IRF1可抑制PRRSV的復(fù)制;同時,采用siRNA干擾技術(shù)證實(shí),敲低IRF1可促進(jìn)PRRSV的復(fù)制。將PRRSV感染MARC-145細(xì)胞和PAMs然后檢測IRF1的含量,結(jié)果顯示,感染初期PRRSV上調(diào)IRF1的表... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１穩(wěn)定表達(dá)丨ＲＦｌ－ＧＦＰ和ＧＦＰ的ＭＡＲＣ－１４５細(xì)胞的建立??

分析了?ｎｓｐｌｐ是否通過溶酶體途徑降解ＩＲＦ１。將ｐ３ｘＦｌａｇ－ＩＲＦｌ和ｐＣＭＶ－ＨＡ－ｎｓｐｉｐ共轉(zhuǎn)染??ＨＥＫ２９３ＦＴ細(xì)胞，再用溶酶體抑制劑氣喹（Ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ，?ＣＱ）處理細(xì)胞，最后檢測ＩＲＦ１的表達(dá)。??結(jié)果顯示，與未處理紺相比，ＣＱ處理組中ＩＲＦ１的總表達(dá)量顯著增加（圖２－６Ｂ），表明ｎｓｐｉｐ可??通過溶酶體途徑降解ＩＲＦ】。為了進(jìn)一步驗(yàn)證上述結(jié)果，用劑Ｍ遞增的溶酶體抑制劑ＣＱ（３７．５?ｎＭ、??７５?ｐＭ和１５０?ｐＭ）處理共轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，然后檢測１ＲＦ１的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，與對照相比，ＣＱ??處理組中ＩＲＦ１的表達(dá)Ｍ隨ＣＱ濃度的遞增而逐漸增加（圖２－６Ｄ）。綜上結(jié)果，表明ＰＲＲＳＶ的ｎＳｐｌ（３??可通過溶酶體途徑降解ＩＲＦ１

轉(zhuǎn)染ＨＥＫ２９３ＦＴ細(xì)胞，再用劑量遞增的蛋白酶體抑制劑ＭＧ１３２?（２．５ｐＭ、５｜ａＭ和１０ｐＭ）處理??細(xì)胞，最后檢測ＩＲＦ１的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，與對照相比，ＩＲＦ１的總表達(dá)量隨ＭＧ１３２濃度的??升高而顯著增加（圖２－７Ａ），表明ｎｓｐｌＯ可通過蛋白酶體途徑降解ＩＲＦ１。將ｐ３ｘＦｌａｇ－ＩＲＦｌ和??ｐＣＭＶ－ＨＡ－ｎｓｐｌＯ共轉(zhuǎn)染ＨＥＫ２９３ＦＴ細(xì)胞，再用溶酶體抑制劑氯喹（Ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ，?ＣＱ）處理細(xì)胞，??最后檢測ＩＲＦ１的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，與未處理組相比，ＣＱ處理組中ＩＲＦ１的總表達(dá)呈顯著增??力口（圖２－７Ｂ），表明ｎｓｐｌＯ可通過溶酶體途徑降解ＩＲＦ１。為了進(jìn)一步驗(yàn)證上述結(jié)果，用劑Ｍ遞增??的溶酶體抑制劑ＣＱ?（３７．５＾Ｍ、７５ｐＭ和１５０｜ｉＭ）處理共轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，然后檢測ＩＲＦ１的表達(dá)情??況。結(jié)果顯示，與對照相比，ＣＱ處理組中ＩＲＦ１的表達(dá)量隨ＣＱ濃度的遞增而逐漸增加（圖２－７Ｃ）。??綜上


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