定量分析作物群體、組織和細胞以至亞細胞中蛋白質表達水平,對于揭示作物生長發(fā)育過程及其逆境脅迫響應的重要生理代謝與品質產量調控規(guī)律具有十分重要的理論意義。然而,傳統(tǒng)的蛋白質定量技術方法普遍存在著蛋白分析靈敏度低、線性范圍窄、基質干擾嚴重等諸多問題,這在很大程度上制約著從蛋白水平上對作物有關生理過程及其相關代謝機制的深入認識。本文基于多反應監(jiān)測（MRM）質譜分析技術,結合蛋白酶解、凈化和同位素標記等方法的應用,建立了適用于水稻功能蛋白的絕對定量方法,并成功實現(xiàn)了水稻籽粒中Glb33蛋白的絕對定量。主要研究結果如下:1、開發(fā)了16種典型水稻葉片蛋白的MRM質譜分析方法。以實際監(jiān)測到的16種典型水稻蛋白為研究對象,對其酶解特征肽段進行選擇和質譜條件優(yōu)化。結果表明,以乙腈和0.1%（v/v）甲酸水溶液為流動相結合二元梯度洗脫,16種肽段在Poroshell 120 EC-C18色譜柱上獲得良好的分離;在0.02⁵00 nM范圍內,各肽段濃度與質譜響應值呈良好的線性關系,相關系數(shù)均大于0.99;儀器的檢出限和定量限范圍分別達到0.007⁰.5 nM和0.... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

蛋白質組學分析策略

基于質譜的蛋白質組學的技術路線(Kim et al.,2014)

蛋白質標記定量和非標記定量方法的技術路線(Anand et al.,2016)

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]穗分化期外施24-表油菜素內酯（EBR）促進水稻源、庫及籽粒灌漿的生理機制[J]. 李贊堂,王士銀,姜雯宇,張帥,張少斌,徐江.  作物學報. 2018(04)
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本文編號：3079396