本文關(guān)鍵詞：雞小腸中多種轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)變化及其對(duì)糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT2的表達(dá)調(diào)控，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：生長(zhǎng)速度慢,飼料轉(zhuǎn)化率低是我國(guó)地方雞種普遍存在的問(wèn)題。雞腸道的發(fā)育直接影響雞生長(zhǎng)速度和飼料轉(zhuǎn)化率。糖類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收是個(gè)體發(fā)育過(guò)程中組織器官功能實(shí)現(xiàn)的必要條件。這一吸收過(guò)程主要由糖類(lèi)營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白來(lái)完成,而糖類(lèi)營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因何時(shí)表達(dá),表達(dá)量的多少等都要受到多個(gè)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的調(diào)控。本研究旨在從腸道營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)調(diào)控的角度來(lái)研究營(yíng)養(yǎng)吸收問(wèn)題,在分子水平闡明營(yíng)養(yǎng)吸收的分子機(jī)制,為實(shí)現(xiàn)飼料轉(zhuǎn)化率高的優(yōu)良雞種的育種目標(biāo)提供研究基礎(chǔ)。本研究選用剛出雛體重相近、發(fā)育正常的雄性愛(ài)拔益加肉雞和白來(lái)航蛋雞各200只,隨機(jī)分為兩組,共四組進(jìn)行飼養(yǎng)。飼養(yǎng)情況分別為：肉雞飼喂肉雞飼料,肉雞飼喂蛋雞飼料,蛋雞飼喂肉雞飼料及蛋雞飼喂蛋雞飼料。分別測(cè)定各組試驗(yàn)雞1、3、7、14和28日齡的體重、小腸重和小腸長(zhǎng),并檢測(cè)了USF1 (Upstream Stimulatory Factor 1, USF1)和GATA3 (GATA Binding Protein 3, GATA3)基因的絕對(duì)表達(dá)量。研究飼料、雞種及其交互作用對(duì)雞小腸USF1和GATA3基因表達(dá)量變化與雞生長(zhǎng)性狀的影響。另外,糖類(lèi)營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT2 (Glucose Transporter 2, GLUT2)是雞小腸中主要的糖類(lèi)轉(zhuǎn)運(yùn)載體,它的表達(dá)直接影響雞腸道糖類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。為了探索轉(zhuǎn)錄因子CDXA (Caudal Type Homebox Transcription Factor A)、USF1和GATA3通過(guò)結(jié)合3LUT2基因5’端上游順式作用元件調(diào)控該基因表達(dá)的機(jī)制,本研究構(gòu)建了真核表達(dá)載體pcDNA3.1-CDXA、 pcDNA3.1-USF1和pcDNA3.1-GATA3。對(duì)雞小腸上皮細(xì)胞(Intestina Epithelial Cells, ICE)進(jìn)行體外培養(yǎng),通過(guò)轉(zhuǎn)染使轉(zhuǎn)錄因子CDXA、USF1和GATA3過(guò)表達(dá),用絕對(duì)熒光定量PCR檢測(cè)比較轉(zhuǎn)染后GLUT2基因表達(dá)量的變化。獲得以下主要結(jié)果：(1)隨著日齡的增加,愛(ài)拔益加肉雞和白來(lái)航蛋雞的體重、小腸重和小腸長(zhǎng)均在不斷增長(zhǎng),并且USF1和GATA3基因表達(dá)量隨著日齡的增加均有極顯著差異(P0.01)。(2)愛(ài)拔益加肉雞體重、小腸重和小腸長(zhǎng)明顯大于白來(lái)航蛋雞(P0.01)。不同飼料對(duì)14日齡的雞體重影響差異極顯著(P0.01),而對(duì)小腸重影響差異顯著(P0.05),對(duì)3日齡和7日齡的雞體重影響差異顯著(P0.05),對(duì)28日齡的雞小腸重和小腸長(zhǎng)影響差異極顯著(P0.01)。飼料與雞種存在互作效應(yīng),對(duì)14日齡的雞體重影響差異極顯著(P0.01),對(duì)3日齡的雞小腸重影響差異顯著(P0.05),而對(duì)7日齡的雞小腸重影響差異極顯著(P0.01),對(duì)7日齡的雞小腸長(zhǎng)影響差異顯著(P0.05)。(3)愛(ài)拔益加肉雞和白來(lái)航蛋雞相關(guān)性狀及USF1基因表達(dá)量在不同飼料間的差異均不顯著(P0.05),而不同飼料間GATA3基因表達(dá)量差異顯著(P0.05)。飼料和雞種互作效應(yīng)對(duì)28日齡USF1基因的表達(dá)量影響差異顯著(P0.05)。(4)雞種和飼料交互作用對(duì)雞生長(zhǎng)性狀及USF1和GATA3基因表達(dá)量的影響差異均不顯著(P0.05)。(5)CDXA、USF1和GATA3三種轉(zhuǎn)錄因子過(guò)表達(dá)后,比較各組糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因GLUT2表達(dá)量的變化。研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子CDXA過(guò)表達(dá)對(duì)IEC細(xì)胞中GLUT2基因的表達(dá)有抑制作用；轉(zhuǎn)錄因子USF1和GATA3過(guò)表達(dá)對(duì)GLUT2基因的表達(dá)有正調(diào)控作用。綜上所述,本研究不僅為家禽營(yíng)養(yǎng)和育種的研究提供了部分基因表達(dá)調(diào)控信息,為闡明糖代謝過(guò)程中各基因間互作機(jī)制提供理論依據(jù),而且為培育具有高飼料轉(zhuǎn)化率遺傳特性的優(yōu)良雞種提供了研究基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：生長(zhǎng)性狀 CDXA USF1 GATA3 GLUT2
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S831
【目錄】：

• 摘要8-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-29
• 1 飼料轉(zhuǎn)化率10-12
• 1.1 飼料轉(zhuǎn)化率的影響因素10-11
• 1.2 愛(ài)拔益加肉雞11
• 1.3 白來(lái)航蛋雞11-12
• 2 腸道糖類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收12-19
• 2.1 糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT212-13
• 2.2 真核轉(zhuǎn)錄調(diào)控13-19
• 3 真核表達(dá)載體的構(gòu)建19-22
• 4 本研究的目的與意義22-24
• 參考文獻(xiàn)24-29
• 第二章 肉雞和蛋雞小腸轉(zhuǎn)錄因子USF1和GATA3表達(dá)分析29-58
• 1 材料與方法29-36
• 1.1 試驗(yàn)材料29-31
• 1.2 試驗(yàn)方法31-36
• 2 試驗(yàn)結(jié)果36-51
• 2.1 飼料轉(zhuǎn)化率分析36-38
• 2.2 各生長(zhǎng)階段蛋雞和肉雞的體重、小腸重、小腸長(zhǎng)的比較38-43
• 2.3 USF1和GATA3基因標(biāo)準(zhǔn)曲線和熔解曲線43-46
• 2.4 USF1和GATA3基因mRNA表達(dá)量測(cè)定結(jié)果46-50
• 2.5 生長(zhǎng)性狀與USFl和GATA3基因表達(dá)量相關(guān)性分析50-51
• 3 討論51-54
• 3.1 影響飼料轉(zhuǎn)化率的因素51
• 3.2 雞種、飼料及其互作效應(yīng)對(duì)不同生長(zhǎng)階段的雞體重、小腸重和小腸長(zhǎng)的影響51-52
• 3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的應(yīng)用52-53
• 3.4 雞種、飼料及其互作效應(yīng)對(duì)雞小腸中USF1 mRNA表達(dá)量的影響53-54
• 3.5 雞種、飼料及其互作效應(yīng)對(duì)雞小腸中GATA3 mRNA表達(dá)量的影響54
• 4 小結(jié)54-56
• 參考文獻(xiàn)56-58
• 第三章 轉(zhuǎn)錄因子CDXA、USF1和GATA3真核表達(dá)載體的構(gòu)建58-76
• 1 材料與方法58-69
• 1.1 試驗(yàn)材料58-60
• 1.2 試驗(yàn)方法60-69
• 2 結(jié)果與分析69-73
• 2.1 基因CDXA、USF1、和GATA3的擴(kuò)增片段69-70
• 2.2 真核表達(dá)載體的酶切鑒定70-73
• 3 討論73-74
• 3.1 真核表達(dá)載體73
• 3.2 影響真核表達(dá)載體構(gòu)建的因素73-74
• 4 小結(jié)74-75
• 參考文獻(xiàn)75-76
• 第四章 轉(zhuǎn)錄因子CDXA、USF1、GATA3過(guò)表達(dá)對(duì)糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT2表達(dá)的影響76-98
• 1 材料與方法76-86
• 1.1 試驗(yàn)材料76-78
• 1.2 試驗(yàn)方法78-86
• 2 結(jié)果與分析86-93
• 2.1 轉(zhuǎn)錄因子CDXA、USF1和GATA3在GLUT2基因5'調(diào)控區(qū)結(jié)合位點(diǎn)情況86-87
• 2.2 雞小腸上皮細(xì)胞體外分離培養(yǎng)及鑒定結(jié)果87-88
• 2.3 雞小腸上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染后形態(tài)學(xué)觀察88
• 2.4 IEC中RNA提取結(jié)果88-89
• 2.5 GLUT2絕對(duì)熒光定量標(biāo)準(zhǔn)曲線和熔解曲線89-90
• 2.6 CDXA基因絕對(duì)熒光定量標(biāo)準(zhǔn)曲線和熔解曲線90-91
• 2.7 目的基因mRNA的表達(dá)量檢測(cè)結(jié)果91-93
• 3 討論93-95
• 3.1 雞IEC體外分離培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染93-94
• 3.2 轉(zhuǎn)錄因子CDXA對(duì)GLUT2基因表達(dá)的影響94
• 3.3 轉(zhuǎn)錄因子USF1對(duì)GLUT2基因表達(dá)的影響94-95
• 3.4 轉(zhuǎn)錄因子GATA3對(duì)GLUT2基因表達(dá)的影響95
• 4 小結(jié)95-96
• 參考文獻(xiàn)96-98
• 全文結(jié)論98-99
• 特色與創(chuàng)新99-100
• 不足與展望100-102
• Abstract102-104
• 附錄104-106
• 致謝106

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