發(fā)布時間：2017-03-20 11:09

  本文關(guān)鍵詞：青楊脊虎天牛的無公害控制技術(shù)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：青楊脊虎天牛是近些年危害北方楊樹的主要蛀干類害蟲之一,本文以青楊脊虎天牛為研究對象,從7種白僵菌中篩選出對青楊脊虎天牛幼蟲具有高毒力的球孢白僵菌Bb01菌株,并對其進行分子鑒定、生物學(xué)特性及致病影響因子研究,并開展了其對青楊脊虎天牛幼蟲的致病和致病機理的探索；采用釋放花絨寄甲和管式腫腿蜂兩種天敵,以及白僵菌無紡布技術(shù)對青楊脊虎天牛進行室內(nèi)外防治試驗；采用不同頻率的黑光燈在野外對青楊脊虎天牛成蟲進行誘捕試驗,結(jié)果如下：1.采用不同品種的7個白僵菌菌株對青楊脊虎天牛幼蟲進行生物測定,結(jié)果表明：從原始寄主中分離的未知菌株對青楊脊虎天牛幼蟲具有較高的致病力,死亡率為93.33%,校正死亡率為92.86%,感染率為85.71%,LT50為4.69d,LC50為4.77×106mL-1。該菌株與其它菌株間致死率差異顯著。球孢白僵菌對青楊脊虎天牛幼蟲的致病力明顯高于布氏白僵菌。2.對未知菌株進行分子鑒定。TRIzol法提取DNA,采用真菌ITS-4通用引物,PCR特異性擴增效果極佳,測序后通過ITS序列分析得出未知菌株的序列長度為573bp,與NCBI數(shù)據(jù)庫中已知球孢白僵菌菌株的相似度為99%,并定名為球孢白僵菌Bb01菌株。3.球孢白僵菌Bb01菌株的最適培養(yǎng)基為改良馬丁氏培養(yǎng)基,菌落生長和產(chǎn)孢的最優(yōu)培養(yǎng)溫度為26℃,最佳濕度為100%,菌落的生長和孢子產(chǎn)量隨著紫外線照射時間的延長而減少。4.球孢白僵菌Bb01對青楊脊虎天牛成蟲的致病力不高,僅為16.67%；26-28℃條件下對青楊脊虎天牛幼蟲的致病力最大,LT50分別為2.23d和2.58d,濕度在100%時的致病力最大,LT50為2.57d；通過蟲體傳代白僵菌可增強菌株的致病力。5.青楊脊虎天牛幼蟲被球孢白僵菌Bb01菌株侵染后,幼蟲體內(nèi)解毒酶和保護酶活性變化明顯,為了抵御白僵菌的侵害,解毒酶系羧酸酯酶、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶和乙酰膽堿酯酶活性呈現(xiàn)先增長后逐漸降低的趨勢,保護酶系過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化物酶(POD)活性均呈現(xiàn)先增長后降低的趨勢,并在72-96h出現(xiàn)最大值。由于白僵菌對幼蟲機體的損傷,蛋白質(zhì)含量和酚氧化酶活性的變化均表現(xiàn)為先上升后下降。6.受白僵菌侵染后的青楊脊虎天牛幼蟲蟲體外部發(fā)生深淺不一的顏色變化,且在掃描電鏡下觀察白僵菌孢子在體壁上萌發(fā),以芽管穿透體壁進行侵染,在體表大量增殖；通過投射電鏡觀察在白僵菌的作用下青楊脊虎天牛幼蟲的表皮組織和細(xì)胞、肌肉組織、脂肪體、細(xì)胞器、氣孔均受到破壞。7.采用花絨寄甲和管氏腫腿蜂對青楊脊虎天牛進行防治,結(jié)果表明：溫度對花絨寄甲卵孵化有明顯影響,溫度過高和過低均影響孵化率；花絨寄甲室內(nèi)以1：100和1：3(寄主：寄甲)的比例投放卵或成蟲對青楊脊虎天牛幼蟲的寄生率為100%和66.67%,人工木段模擬投放以1：100和1：3(寄主：寄甲)比例投放花絨寄甲卵或成蟲對青楊脊虎天牛幼蟲的寄生率分別達到86.67%和72.22%；在木質(zhì)部裸露狀木段上投放花絨寄甲成蟲或卵寄生率最高,以卵卡形式防治具有較高的防治效果；管氏腫腿蜂室內(nèi)釋放對青楊脊虎天牛老齡幼蟲具有較高的寄生率,且增加天敵數(shù)量能有明顯增加寄主死亡率；半自然狀態(tài)下以1：5的蟲蜂比例投放,對幼蟲的校正死亡率為52.13%,但林間防治建議以1：3的比例投放；7種白僵菌菌株制作的無紡布室外條件下30d內(nèi)孢子含量持續(xù)下降,篩選出防治青楊脊虎天牛的最佳菌株為球孢白僵菌Bb01和布氏白僵菌BbCF327,可作為林間防治的備用菌株。8.采用不同波段的黑光燈在野外對青楊脊虎天牛成蟲進行誘捕實驗,結(jié)果表明,青楊脊虎天牛成蟲對紫外低波段320-368nm間具有趨光性,對368nm(黃)最為敏感,最佳誘捕時間為20：00-22：00,天氣條件下晴天的誘捕效果要比晴轉(zhuǎn)陰和陰天要好,黑光燈可作為當(dāng)?shù)厍鄺罴够⑻炫Ｎ：Φ妮o助監(jiān)測手段。
【關(guān)鍵詞】：青楊脊虎天牛 白僵菌 致病機理 花絨寄甲 管氏腫腿蜂 黑光燈
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S763
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-18
• 1 緒論18-31
• 1.1 青楊脊虎天牛的分布、發(fā)生和危害18-19
• 1.2 青楊脊虎天牛的研究現(xiàn)狀19-20
• 1.2.1 青楊脊虎天牛的生物學(xué)特性19
• 1.2.2 化學(xué)生態(tài)和抗性生理19-20
• 1.2.3 功能器官的研究20
• 1.2.4 分子生物學(xué)研究20
• 1.3 青楊脊虎天牛的防治措施20-22
• 1.3.1 營林措施20-21
• 1.3.2 化學(xué)農(nóng)藥防治技術(shù)21-22
• 1.4 蟲生真菌的研究進展22-26
• 1.4.1 白僵菌的研究進展22
• 1.4.2 白僵菌的生物特性研究22-24
• 1.4.3 白僵菌對寄主的致病過程24
• 1.4.4 白僵菌病的病理變化24-25
• 1.4.5 白僵菌無紡布防治研究25-26
• 1.5 生物手段防治天牛的措施26-27
• 1.5.1 花絨寄甲的研究進展26-27
• 1.5.2 管氏腫腿蜂的研究進展27
• 1.6 物理防治技術(shù)27-28
• 1.7 研究的目的與意義28
• 1.8 研究內(nèi)容28-30
• 1.9 技術(shù)路線30-31
• 2 青楊脊虎天牛幼蟲高毒力致病菌的篩選31-35
• 2.1 材料與方法31-32
• 2.1.1 供試材料31-32
• 2.1.1.1 試蟲31
• 2.1.1.2 供試菌株31-32
• 2.2 實驗方法32
• 2.2.1 孢子懸濁液的制備32
• 2.2.2 生物測定32
• 2.2.3 高毒力菌株致死中濃度(LC_(50))的確定32
• 2.2.4 數(shù)據(jù)處理32
• 2.3 結(jié)果與分析32-34
• 2.3.1 致死中時(LC_(50))的確定32-33
• 2.3.2 未知菌株致死中濃度(LC_(50))的確定33-34
• 2.4 本章小結(jié)34-35
• 3 未知菌株的分子鑒定及ITS序列分析35-41
• 3.1 材料與方法35-36
• 3.1.1 供試材料35
• 3.1.2 實驗試劑與儀器35-36
• 3.2 實驗方法36-38
• 3.2.1 DNA的提取36
• 3.2.2 PCR的方法36-37
• 3.2.3 凝膠電泳的制備37
• 3.2.4 未知菌株DNA序列的測定和分析37-38
• 3.3 結(jié)果與分析38-40
• 3.3.1 DNA電泳分析38
• 3.3.2 PCR產(chǎn)物分析38-39
• 3.3.3 DNA序列分析39-40
• 3.4 本章小結(jié)40-41
• 4 球孢白僵菌Bb01菌株的生物學(xué)特性41-48
• 4.1 材料41
• 4.1.1 供試菌株41
• 4.1.2 藥品41
• 4.1.3 供試儀器41
• 4.2 試驗方法41-43
• 4.2.1 培養(yǎng)基質(zhì)對Bb01菌株營養(yǎng)生長的影響41-42
• 4.2.2 溫度對Bb01菌株生長的影響42
• 4.2.3 濕度對Bb01菌落生長的影響42
• 4.2.4 紫外照射對Bb01菌落生長的影響42-43
• 4.3 結(jié)果與分析43-46
• 4.3.1 培養(yǎng)基質(zhì)對菌落的生長影響43
• 4.3.2 溫度對菌落生長情況的影響43-44
• 4.3.3 濕度對菌落生長情況的影響44-45
• 4.3.4 紫外線照射對菌落生長情況的影響45-46
• 4.4 本章小結(jié)46-48
• 5 環(huán)境條件對球孢白僵菌Bb01菌株致病力的影響48-55
• 5.1 材料與方法48-50
• 5.1.1 供試材料48-49
• 5.1.2 孢子懸浮液的制備49
• 5.1.3 試驗方法49-50
• 5.1.3.1 球孢白僵菌Bb01對青楊脊虎天牛成蟲的侵染49
• 5.1.3.2 溫度對球孢白僵菌Bb01菌株侵染力的影響49
• 5.1.3.3 濕度對球孢白僵菌Bb01菌株侵染力的影響49
• 5.1.3.4 菌株傳代方式對侵染力的影響49-50
• 5.2 結(jié)果與分析50-52
• 5.2.1 青楊脊虎天牛成蟲被球孢白僵菌侵染后外部特征50
• 5.2.2 球孢白僵菌Bb01對青楊脊虎天牛成蟲的侵染力50-51
• 5.2.3 溫度對球孢白僵菌Bb01菌株侵染力的影響51
• 5.2.4 濕度對球孢白僵菌Bb01菌株侵染力的影響51-52
• 5.2.5 傳代方式對青楊脊虎天牛幼蟲侵染力的影響52
• 5.3 本章小結(jié)52-55
• 6 球孢白僵菌Bb01菌株侵染青楊脊虎天牛幼蟲后的病理性分析55-66
• 6.1 材料與方法55-58
• 6.1.1 材料55
• 6.1.2 試驗方法55-58
• 6.1.2.1 酶液的制備55
• 6.1.2.2 青楊脊虎天牛幼蟲保護酶活性的測定55-56
• 1 )過氧化氫酶(CAT)活性測定方法55-56
• 2 )超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定56
• 3 )過氧化物酶(POD)活性的測定56
• 6.1.2.3 青楊脊虎天牛幼蟲解毒酶活性的測定56-57
• 1 )羧酸酯酶(CarE)活性的測定56-57
• 2 )谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性的測定57
• 3 )乙酰膽堿酯酶(AchE)活性的測定57
• 6.1.2.4 蛋白質(zhì)含量的測定57-58
• 6.1.2.5 酚氧化酶活性的測定58
• 6.1.2.6 數(shù)據(jù)處理58
• 6.2 結(jié)果與分析58-63
• 6.2.1 球孢白僵菌菌株Bb01侵染后對青楊脊虎天牛幼蟲解毒酶活性的影響58-60
• 6.2.2 球孢白僵菌Bb01菌株侵染后對青楊脊虎天牛幼蟲保護酶活性的影響60-61
• 6.2.3 球孢白僵菌Bb01菌株侵染后對青楊脊虎天牛幼蟲蛋白質(zhì)含量的影響61-62
• 6.2.4 球孢白僵菌Bb01菌株侵染后對青楊脊虎天牛幼蟲酚氧化酶含量的影響62-63
• 6.3 本章小結(jié)63-66
• 7 球孢白僵菌對青楊脊虎天牛幼蟲的侵染過程及超微結(jié)構(gòu)觀察66-77
• 7.1 材料與方法66-67
• 7.1.1 供試?yán)ハx66
• 7.1.2 供試菌株66
• 7.1.3 電鏡觀察供試蟲體的制備66
• 7.1.4 染菌青楊脊虎天牛幼蟲外部形態(tài)觀察的制備66-67
• 7.1.5 掃描電鏡樣品制備及觀察67
• 7.1.6 透射電鏡樣品制備及觀察67
• 7.2 結(jié)果與分析67-74
• 7.2.1 白僵菌侵染后青楊脊虎天牛幼蟲外部特征67-68
• 7.2.2 掃描電鏡結(jié)果68-70
• 7.2.3 透射電鏡結(jié)果70-74
• 7.3 本章小結(jié)74-77
• 8 青楊脊虎天牛生物防治技術(shù)的研究77-88
• 8.1 材料與方法77-80
• 8.1.1 供試材料77-78
• 8.1.1.1 青楊脊虎天牛的獲得77-78
• 8.1.1.2 花絨寄甲的保存78
• 8.1.1.3 管氏腫腿蜂的保存78
• 8.1.1.4 供試菌株78
• 8.1.1.5 無紡布的制作78
• 8.1.2 試驗方法78-80
• 8.1.2.1 溫度對花絨寄甲卵孵化的影響78
• 8.1.2.2 花絨寄甲成蟲和卵的室內(nèi)寄生試驗78-79
• 8.1.2.3 室外半自然環(huán)境下花絨寄甲成蟲卵的寄生試驗79
• 8.1.2.4 管氏腫腿蜂室內(nèi)寄生試驗79
• 8.1.2.5 管氏腫腿蜂半自然環(huán)境寄生試驗79-80
• 8.1.2.6 白僵菌無紡布對青楊脊虎天牛成蟲室外的生物測定80
• 8.1.3 數(shù)據(jù)處理80
• 8.2 結(jié)果與分析80-85
• 8.2.1 花絨寄甲寄生結(jié)果80-83
• 8.2.1.1 花絨寄甲寄生后青楊脊虎天牛的外部形態(tài)變化80-81
• 8.2.1.2 溫度對花絨寄甲卵孵孵化的影響81
• 8.2.1.3 花絨寄甲室內(nèi)寄生結(jié)果81-82
• 8.2.1.4 半自然環(huán)境花絨寄甲的寄生結(jié)果82-83
• 8.2.2 管氏腫腿蜂寄生結(jié)果83-84
• 8.2.2.1 管氏腫腿蜂室內(nèi)寄生結(jié)果83-84
• 8.2.2.2 管氏腫腿蜂半自然環(huán)境寄生結(jié)果84
• 8.2.3 無紡布防治結(jié)果84-85
• 8.2.3.1 室外白僵菌無紡布孢子含量的變化84-85
• 8.2.3.2 白僵菌無紡布室外防治青楊脊虎天牛成蟲的結(jié)果85
• 8.3 本章小結(jié)85-88
• 9 黑光燈對青楊脊虎天牛誘捕的研究88-91
• 9.1 材料與方法88-89
• 9.1.1 實驗材料88
• 9.1.2 不同波段黑光燈誘殺青楊脊虎天牛成蟲的測定88-89
• 9.2 結(jié)果與分析89-90
• 9.2.1 不同波段黑光燈誘殺測定結(jié)果89
• 9.2.2 黑光燈不同時段誘殺青楊脊虎天牛成蟲的結(jié)果89-90
• 9.2.3 天氣條件對誘殺青楊脊虎天牛成蟲的影響90
• 9.3 本章小結(jié)90-91
• 結(jié)論91-93
• 參考文獻93-110
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文110-111
• 致謝111-112

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李增智;;中國蟲生真菌應(yīng)用50年簡史(英文)[J];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2007年02期

2 李農(nóng)昌，樊美珍，李春如，李華，高智輝，朱潤德;白僵菌有關(guān)培養(yǎng)條件及其與毒力關(guān)系的研究[J];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;1996年03期

3 胡景江，，樊美珍;球孢白僵菌胞外蛋白酶與其毒力的關(guān)系[J];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;1996年03期

4 王衛(wèi)東,趙軍,小倉信夫;花絨穴甲幼蟲人工飼料的開發(fā)研究[J];北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報;1999年04期

5 張翌楠;季紹薇;楊忠岐;姜Z

本文編號：257674