本文關鍵詞：Human iPS培養(yǎng)液對延邊黃牛體外受精卵發(fā)育的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《延邊大學》 2015年

Human iPS培養(yǎng)液對延邊黃牛體外受精卵發(fā)育的影響

高青山  

【摘要】：為加強延邊黃牛品種保存,保持物種的多樣性和保護生態(tài)平衡,為延邊黃牛品種資源開發(fā)和永續(xù)利用,本研究圍繞如何提高延邊黃牛體外生產(chǎn)胚胎移植妊娠率的關鍵點,從體外受精胚胎各階段的培養(yǎng)方法,操作技術及移植囊胚質(zhì)量等環(huán)節(jié)展開了深入研究,結(jié)果如下：1.本試驗對延邊黃牛體外胚胎生產(chǎn)體系中,如何提高妊娠率的同時,降低生產(chǎn)成本、簡化操作程序等方面進行探索研究。試驗結(jié)果表明同培養(yǎng)液條件下廉價的35mm dish組的卵裂率顯著高于(P0.05)昂貴的4孔板組,囊胚發(fā)育率沒有差異；PBS液精子處理組與BO液精子處理組卵裂率與囊胚率均沒有差異,但PBS組相比BO組操作簡便且成本低廉；受精時間的比較研究中PBS 22h組比PBS 6h組,BO 6h、22h組都有顯著性差異(P0.05)。2.提高囊胚質(zhì)量和增加囊胚細胞數(shù)是十分重要的,含有大量細胞數(shù)的囊胚有利于單囊胚分析。正常情況下想要進行DNA的分析往往需要若干個囊胚才能做到,如果能增加單個囊胚的細胞數(shù),我們僅需一個囊胚便可進行DNA分析。囊胚移植是目前為止牛胚胎移植技術最常用的方法,高質(zhì)量形態(tài)的囊胚和具有大量細胞數(shù)的囊胚移植后可提高妊娠率。胚胎干細胞(ES)是來源于囊胚內(nèi)細胞團(ICM),目前已建立人和小鼠的胚胎干細胞,但科學家試圖從家畜建立ES細胞系都失敗了,部分原因是由于沒有制定合適的培養(yǎng)條件,因此,制備一種可獲得更大內(nèi)細胞團的新型體外培養(yǎng)體系,來提高ES細胞系建立的成功率迫在眉睫。.本試驗通過比較人誘導多功能干細胞(hiPS)培養(yǎng)基與牛體外培養(yǎng)II型(B-IVC-Ⅱ)培養(yǎng)基,探究了兩種培養(yǎng)基對牛體外受精早期胚胎的影響。將體外受精后牛囊胚分別在hiPS培養(yǎng)基、B-IVC-Ⅱ培養(yǎng)基中培養(yǎng)2天,測量囊胚直徑,結(jié)果顯示hiPS培養(yǎng)基組顯著高于B-IVC-Ⅱ培養(yǎng)基組,直徑分別為150.30±29.49μm與195.58±41.59μm(P0.01),并且牛囊胚總細胞數(shù)hiPS培養(yǎng)基組顯著高于B-IVC-Ⅱ培養(yǎng)基組,相差2倍之多,細胞數(shù)分別為172.12±45.08,604.83±242.64(P0.01)。本實驗結(jié)果表明,hiPS培養(yǎng)基可以顯著提高牛囊胚的質(zhì)量。3.首次獲得地方特色品種延邊黃牛的體外受精胚胎移植牛。本試驗通過以本地飼養(yǎng)量較大的延邊黃牛作為受體母牛,通過胚胎移植技術手段改善肉牛繁殖效率,增加母牛產(chǎn)仔率等。同期發(fā)情技術、胚胎移植技術等生物技術的研究、改良及推廣,能夠加速規(guī)�；B(yǎng)殖進程,在地方特色品種的保護和擴繁上發(fā)揮關鍵性作用。本實驗表明同期發(fā)情組1(添加維生素ADE)、同期發(fā)情組2和自然發(fā)情各組之間無顯著差異(P0.05),其中受胎率最高組為同期發(fā)情組1,共同期發(fā)情43頭,胚胎移植27頭,妊娠8頭,產(chǎn)犢7頭,其受胎率和產(chǎn)犢率分別是29.63%和16.28%；受胎率最低組為自然發(fā)情組,共胚胎移植19頭,妊娠4頭,產(chǎn)犢2頭(雙胎)見圖4.1,其受胎率和產(chǎn)犢率分別是21.43%和10.53%；同期發(fā)情組2共同期發(fā)情49頭,胚胎移植38頭,妊娠10頭,產(chǎn)犢8頭,其受胎率和產(chǎn)犢率分別是26.28%和21.05%。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S823.81
【目錄】：

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