本文關(guān)鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征高致病性毒株的致弱評(píng)價(jià)與相關(guān)分子機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2015年

豬繁殖與呼吸綜合征高致病性毒株的致弱評(píng)價(jià)與相關(guān)分子機(jī)制研究

劉燦  

【摘要】：為了有效防控PRRS以促進(jìn)生豬養(yǎng)殖行業(yè)的健康發(fā)展,本研究從弱毒疫苗參考株的科學(xué)評(píng)價(jià)、PRRSV的體外致弱分子機(jī)制的探尋以及華北、華中與華南地區(qū)流行PRRSV的分子特征與遺傳進(jìn)化規(guī)律的調(diào)查等三個(gè)方向進(jìn)行了有益探索。 首先,為了科學(xué)評(píng)價(jià)高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(HP-PRRSV) BJ株與GD株的傳代致弱毒株BJ-F80、BJ-F150、GD-F80與GDr180的安全性與免疫保護(hù)性,對(duì)接種不同毒株的仔豬從臨床表現(xiàn)、增重、病毒血癥與抗體水平進(jìn)行了細(xì)致觀察,在接種28天后使用強(qiáng)毒株進(jìn)行了攻毒保護(hù)試驗(yàn),在進(jìn)行臨床觀察的同時(shí),定期剖殺各組仔豬觀察大體病變,采取肺臟組織制備病理切片以觀察顯微病理?yè)p傷,應(yīng)用免疫組化染色技術(shù)與熒光定量PCR技術(shù)分別對(duì)肺臟與血清中的PRRSV進(jìn)行半定量與定量檢測(cè),應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)了不同時(shí)間段各組動(dòng)物血清中抗體水平。結(jié)果顯示BJ-F80、GD-F80與BJ-F150接種仔豬仍存在不同程度的病理?yè)p傷,而GDr180接種仔豬與對(duì)照組仔豬均無(wú)明顯病理變化,免疫組化與熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示BJ-F80、GD-F80與BJ-F150的體內(nèi)增殖速度明顯快于GDr180,抗體檢測(cè)結(jié)果顯示GDr180在接種后28天以及攻毒后均能提供仔豬更高抗體水平且具備良好的保護(hù)效果。綜上所述,BJ-F80、GD-F80與BJ-F150的致弱效果并不理想,而GDr180的安全性與免疫保護(hù)性達(dá)到了理想水平。 其次,為了探索PRRSV的體外致弱分子機(jī)制,分別比對(duì)分析了PRRSV BJ株傳代至BJ-F150株的7個(gè)中間代次毒株與GD株傳代至GDr180株的8個(gè)中間代次毒株的全基因序列與各蛋白氨基酸序列,發(fā)現(xiàn)BJ株傳代過(guò)程中共出現(xiàn)了68個(gè)核苷酸變異,造成了37個(gè)氨基酸變異,GD株傳代過(guò)程中共出現(xiàn)了50個(gè)核苷酸變異,造成了33個(gè)氨基酸變異,但兩者的不同點(diǎn)在于BJ株的若干位點(diǎn)出現(xiàn)了反復(fù)變異的情況,而GD株的變異位點(diǎn)則顯得更為穩(wěn)定,推測(cè)基因變異之后的穩(wěn)定性與弱毒株的毒力返強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)存在較大關(guān)聯(lián)。然后,將BJ/BJ-F150、GD/GDr180與另外四對(duì)強(qiáng)毒株／疫苗株(VR-2332/RespPRRS MLV、JA142/Ingelvac ATP、CH-la/CH-lR與JXAl/JXAl-R)的全基因序列與各蛋白氨基酸序列進(jìn)行了比對(duì)分析,總結(jié)歸納出強(qiáng)毒株向弱毒株演化的各個(gè)蛋白中的共同變異氨基酸位點(diǎn)共74個(gè),推測(cè)其與PRRSV的致病性相關(guān)。此外,將上述6對(duì)強(qiáng)毒株／致弱株與1996-2014年間中國(guó)各地流行PRRSV進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析,發(fā)現(xiàn)PRRSV的兩個(gè)主要分支都與弱毒疫苗株的同源性較高,推測(cè)PRRSV在中國(guó)的廣泛流行與高頻率演化與弱毒疫苗的不合理使用有關(guān),應(yīng)在臨床應(yīng)用中引起重視。 最后,從華北、華中與華南地區(qū)的臨床病料中分離到3株P(guān)RRSV,分別為GD-2011株、HEB-2013株與HUN-2014株,這三株P(guān)RRSV均屬于北美型中的HP-PRRSV,具有NSP2中的1+29個(gè)氨基酸缺失這一基因標(biāo)志,此外,GD-2011株的GP5中存在1個(gè)氨基酸插入為首次報(bào)道。將這三株新分離PRRSV與其各屬地區(qū)的歷年分離毒株進(jìn)行全基因序列與氨基酸序列比對(duì)分析以及遺傳演化分析,結(jié)果表明華北與華南地區(qū)流行PRRSV的分子多樣性更為復(fù)雜,僅北美型毒株即可分為至少3-4個(gè)亞型,說(shuō)明PRRSV在這些地區(qū)經(jīng)歷著高頻率的變異,而對(duì)變異位點(diǎn)的分析提示我們其與弱毒疫苗的過(guò)度使用可能相關(guān),因此需引起我們對(duì)于合理使用疫苗的重視。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.65
【目錄】：

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  本文關(guān)鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征高致病性毒株的致弱評(píng)價(jià)與相關(guān)分子機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：210303