發(fā)布時間：2018-06-02 08:33

  本文選題：桃褐腐病 + 桃炭疽病��； 參考：《華中農業(yè)大學》2017年博士論文

【摘要】：Monilinia spp.和Colletotrichum spp.是危害桃樹健康生長的重要病原物,分別能引起桃褐腐病和桃炭疽病。本研究以這兩類桃樹主要病原菌為研究材料,探尋了其對包括DMI類殺菌劑在內的幾種主要單作用位點殺菌劑的抗性現(xiàn)狀和抗性機理。在我國桃褐腐病菌優(yōu)勢種Monilinia fructicola中,系統(tǒng)調查了其對4種主要殺菌劑的敏感基線及其對DMI類殺菌劑抗性產生的分子機理。并針對其抗性產生機理,設計了一款利用環(huán)介導等溫擴增(LAMP)方法進行田間抗性菌株檢測的試劑盒。在Colletotrichum spp.中,明確了造成美國東南部桃炭疽病的病原菌,并調查了桃炭疽病菌對DMI類殺菌劑的敏感性,同時對桃炭疽病菌中產生DMI抗性的分子機理進行了探尋。研究結果為綜合防治桃褐腐病和桃炭疽病提供了科學依據(jù)和技術支持。所獲得具體研究結果如下:(1)采集了80株來自我國5個主要產桃省份(市)的商用果園中的桃褐腐菌株,并測定了它們對MBC類殺菌劑多菌靈、QoI類嘧菌酯、DMI類戊唑醇和SDHI類啶酰菌胺的敏感性。其中,采自云南省的16株菌株中,15株對多菌靈產生了抗性。這些抗性菌株的抗性水平穩(wěn)定,不表現(xiàn)出適合度下降的現(xiàn)象,并且和乙霉威產生負交互抗性。離體接種試驗表明,推薦濃度多菌靈無法有效控制抗性菌株在桃上產生的危害。分子水平研究表明,抗性的產生是由β-微管蛋白基因(TUB2)的E198A突變所致。采自福建的10株菌株中,3株具有對嘧菌酯的低等抗性。和多菌靈抗性菌株不同,這些菌株的抗性不穩(wěn)定,且伴隨著適合度下降的現(xiàn)象,在靶標基因細胞色素b(Cyt b)上,未發(fā)現(xiàn)任何點突變。嘧菌酯敏感菌株的抑制中濃度(EC50)為0.02到1.94μg/mL,平均值為0.54μg/m L。所有測定菌株對戊唑醇均敏感,平均EC50為0.03μg/m L。啶酰菌胺對菌株的EC50在0.01到3.85μg/mL之間,平均值為1.02μg/mL。試驗結果表明,對中國大部分地區(qū)的桃褐腐菌株而言,MBC類、QoI類、DMI類和SDHI類殺菌劑都能起到較好的防效,但MBC類殺菌劑的抗性菌株已經(jīng)出現(xiàn)。(2)前期已明確65bp的Mona元件和桃褐腐病菌DMI抗性產生相關,本研究通過遺傳轉化試驗,明確了Mona具有啟動子活性,并通過一系列刪減轉化子,將Mona的活性區(qū)域進一步縮小為20bp。(3)基于Mona元件及其側翼序列,開發(fā)了一款利用環(huán)介導等溫擴增技術(LAMP),快速檢測田間DMI抗性桃褐腐菌株的試劑盒。利用此方法,可以特異地檢測出MfCYP51上游的Mona插入,在75min內,通過加入SYBR Green I染料,觀測結果。試驗中利用該方法,成功檢測了51株桃褐腐菌株樣本對DMI殺菌劑的敏感性。該方法特異性強,�；愿�,不會誤檢出其它6種桃樹上常見病原菌。同時,該方法靈敏度高,可以檢測到10 fg的DNA模板,比普通PCR方法靈敏100倍。試驗還開發(fā)了直接以菌絲為模板,檢測其抗性是否產生的方法。由于LAMP方法具備結果可靠、操作簡便、不需實驗室昂貴儀器等特點,適于DMI抗性菌株的田間檢測。(4)就桃炭疽病菌而言,試驗從美國南卡羅來那州和佐治亞州的商用桃園中采集了Colletotrichum acutatum復合種菌株,整合分析其ITS、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(G3PDH)、β-微管蛋白(TUB2)基因序列,將這些復合種菌株細分成了Colletotrichum nymphaeae和Colletotrichum fioriniae 2個種。接著調查了這2個種,及另外3個采集自美國東南部的桃炭疽種(Colletotrichum fructicola,Colletotrichum siamense和Colletotrichum truncatum),對包括苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、戊唑醇、葉菌唑、粉唑醇和腈苯唑在內6種DMI類殺菌劑的敏感性。結果表明,C.truncatum對戊唑醇、葉菌唑、粉唑醇和腈苯唑產生了抗性,C.nymphaeae對粉唑醇和腈苯唑產生了抗性。C.fructicola和C.siamense對所有的6種DMI類殺菌劑都敏感(EC50值分別為0.2到13.1μg/mL)。C.fioriniae中的一個分支(命名為C.fioriniae亞群2)整體上比另一個分支(命名為C.fioriniae亞群1)對以上殺菌劑較為不敏感,其EC50值分別為0.5到16.2μg/m L,及0.03到2.1μg/mL。對所有測定的5個種而言,苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑都具有最好的防效(EC50值為0.2-2.7μg/m L),戊唑醇和葉菌唑對除了C.truncatum以外的其它種有較好的防效。試驗表明,苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑應作為防治桃炭疽病的首選DMI類殺菌劑。(5)首次克隆了DMI類殺菌劑天然抗性種C.truncatum的CYP51A和CYP51B基因,并發(fā)現(xiàn)該抗性的產生可能是由CYP51B上H373N、M376L和S511T,或者CYP51A上L208Y、H238R、S302A、I366L點突變所造成。
[Abstract]:In this paper , the resistance of strains of peach brown rot and peach was studied . ( 3 ) Based on the Mona element and its flanking sequences , a kit using loop - mediated isothermal amplification ( LAMP ) was developed . The results showed that C . truncatum could be used as the first kind of bactericide for the control of E . truncatum . The EC50 values were 0.2 - 2.7 渭g / mL , 0.03 - 2.1 渭g / mL .
【學位授予單位】：華中農業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S436.621

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 羅朝喜;;果樹褐腐病的研究現(xiàn)狀及其展望[J];植物病理學報;2017年02期

2 牛程旺;王靜茹;朱小瓊;陳笑瑜;國立耘;;新疆野果林褐腐病菌的種類[J];菌物學報;2016年12期

3 郝曉娟;周芳;李新鳳;王美琴;王建明;李俊林;;山西省歐李褐腐病病原菌鑒定[J];西北農業(yè)學報;2015年04期

4 馬艷平;劉振興;郝樂;林敏;孟軒;柯浩;;環(huán)介導等溫擴增技術的研究進展[J];河北科技師范學院學報;2011年01期

5 房雅麗;劉鵬;國立耘;;美澳型核果褐腐病菌(Monilinia fructicola)對嘧菌酯的敏感性[J];果樹學報;2010年04期

6 樊錦艷;房雅麗;國立耘;;美澳型核果褐腐病菌對甲基硫菌靈和啶酰菌胺的敏感性[J];植物保護學報;2009年03期

7 張侖;殷幼平;王中康;;環(huán)介導等溫擴增技術的研究進展[J];貴州農業(yè)科學;2009年06期

8 樊錦艷;朱小瓊;國立耘;駱勇;;褐腐病菌三種分子鑒定方法的比較[J];植物保護學報;2007年03期

9 孫寶海;;桃褐腐病的發(fā)生及防治[J];中國林副特產;2006年05期

10 徐錚,曹永兵,姜遠英;麥角甾醇生物合成途徑中的抗真菌藥作用靶酶[J];國外醫(yī)藥(抗生素分冊);2001年05期

相關博士學位論文 前1條

1 尹良芬;中國核果/仁果類果樹褐腐病菌種群結構及Cyt b基因的遺傳進化研究[D];華中農業(yè)大學;2015年

相關碩士學位論文 前1條

1 邵偉;木瓜褐腐病的病原學、發(fā)生規(guī)律及防治技術研究[D];華中農業(yè)大學;2009年

，

本文編號：1968115