本文選題：偽狂犬病毒　切入點：白細胞介素10　出處：《華中農(nóng)業(yè)大學》2016年博士論文

【摘要】：偽狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)感染豬引起偽狂犬病,導致新生仔豬出現(xiàn)致死性腦炎,育肥豬呼吸障礙,母豬繁殖障礙等癥狀,給養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展造成極為不利的影響,PRV具有潛伏感染的特性,嚴重影響豬場凈化豬偽狂犬病的進程。IL-10是一種重要的多效免疫調(diào)節(jié)因子,病毒潛伏感染誘導的細胞IL-10可阻止病毒潛伏感染的細胞發(fā)生死亡,有助于儲存潛伏感染病毒的基因組。應激顆粒(Stress granules,SGs)作為哺乳動物翻譯系統(tǒng)關(guān)閉的結(jié)果,有利于細胞應對外界環(huán)境壓力(比如熱休克,氧化性應激,局部缺血或者病毒感染)。不同病毒對SGs的影響不同,有些病毒為了借助SGs募集的蛋白完成自身的復制,會誘導病毒感染細胞內(nèi)形成SGs,而有些病毒為了抵抗宿主翻譯休止對自身蛋白質(zhì)和基因組的復制的不利影響,則會破壞感染細胞內(nèi)SGs的累積。本文通過體外研究,探討PRV感染對IL-10及應激顆粒的影響,內(nèi)容及結(jié)果如下:1.PRV感染顯著誘導IL-10的啟動子,m RNA及分泌水平通過雙熒光素酶系統(tǒng)及RT-PCR方法,動態(tài)分析PRV感染PK-15細胞對IL-10啟動子及m RNA的影響,同時,在PAM細胞上,利用ELISA試劑盒檢測PRV對IL-10分泌的影響。我們發(fā)現(xiàn)PRV感染PK-15細胞6 h以上,可極顯著(P0.01)激活I(lǐng)L-10的啟動子活性,且與感染時間有關(guān),隨著感染時間的延長,激活倍數(shù)相應的增加,但是PRV誘導IL-10啟動子與感染劑量無關(guān);而PRV感染PK-15細胞12 h可誘導IL-10 m RNA水平,且與感染劑量有關(guān);PRV感染PAM細胞12h誘導其蛋白水平,18 h達到峰值,隨后逐漸降低。紫外線滅活的PRV不影響PRV誘導IL-10的啟動子,m RNA及蛋白水平,表明PRV誘導IL-10與病毒復制密切相關(guān)。2.IL-10啟動子低甲基化修飾參與PRV誘導IL-10過程通過BSP測序及超表達po DNMTs,分析IL-10啟動子甲基化水平與PRV誘導IL-10的關(guān)系。我們發(fā)現(xiàn),PRV感染PK-15細胞,可顯著減低IL-10啟動子的甲基化水平,且超表達po DNMT3a或者po DNMT3b抑制PRV誘導IL-10的啟動子水平,表明IL-10啟動子的低甲基化參與PRV誘導IL-10的過程。3.PRV感染不誘導SGs累積通過IFA技術(shù),動態(tài)分析PRV感染He La細胞誘導SGs的情況,結(jié)果顯示PRV感染不同時間均不誘導細胞內(nèi)出現(xiàn)SGs,且與感染劑量無關(guān)。為了排除細胞特異性的原因,在PK-15細胞上進行同樣的實驗,我們得到相同的結(jié)果,即PRV感染不能誘導SGs的累積。4.PRV感染破壞陽性刺激物誘導SGs的累積采用IFA技術(shù),動態(tài)分析PRV感染對陽性刺激物Arsenite(依賴e IF2α磷酸化誘導SGs)及Hippuristanol(不依賴e IF2α磷酸化誘導SGs)誘導SGs的影響,結(jié)果顯示PRV感染阻礙這2種刺激物誘導SGs的累積,表明PRV阻礙SGs累積不依賴于e IF2α磷酸化。利用western-blot技術(shù),我們發(fā)現(xiàn)PRV感染的He La細胞內(nèi),TIA-1蛋白水平有所下降,再用Arsenite處理,則TIA-1蛋白水平下降幅度更大,表明PRV感染可能引起TIA-1降解。
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【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65

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本文編號：1668818