本文選題：奶牛乳房炎性諾卡氏菌　切入點(diǎn)：分離鑒定　出處：《中國農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：諾卡氏菌(Nocardia cyriacigeorgica)是一種革蘭氏陽性環(huán)境致病菌,能引人和奶牛的多種諾卡氏菌病。諾卡氏菌性奶牛乳房炎是奶牛諾卡氏菌病中最重要的一種類型,給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成了一定的經(jīng)濟(jì)損失。多種諾卡氏菌能引起奶牛乳房炎的發(fā)生,但是關(guān)于奶牛乳房炎性N.cyriacigeorgica的研究較少。諾卡氏菌誘導(dǎo)奶牛乳房炎發(fā)生的相關(guān)致病機(jī)制尚不清楚。因此本研究通過傳統(tǒng)的細(xì)菌鑒定方法和分子生物學(xué)方法對(duì)河北某牛場(chǎng)暴發(fā)的奶牛乳房炎進(jìn)行了諾卡氏菌的分離和鑒定。同時(shí),本研究通過建立諾卡氏菌感染小鼠乳腺和牛乳腺上皮細(xì)胞(MAC-T細(xì)胞系)模型,采用組織病理學(xué)、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、western blot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR等技術(shù),評(píng)估諾卡氏菌的致病性,探索諾卡氏菌引起奶牛乳房炎的致病機(jī)制。從87份乳房炎樣品中分離到的12株諾卡氏菌均為N.cyriacigeorgica。該諾卡氏菌能在37℃和45℃生長,能分解乙酰胺,能產(chǎn)生過氧化物酶和硝酸鹽還原酶。藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示,諾卡氏菌分離株對(duì)氨芐西林、阿莫西林-克拉維酸、環(huán)丙沙星、米諾環(huán)素、利福平和氨基糖苷類等藥物表現(xiàn)多重耐藥性;對(duì)阿米卡星、磺胺甲惡唑、頭孢噻肟和亞胺培南敏感。這對(duì)于指導(dǎo)臨床用藥具有重要意義。小鼠乳房炎模型結(jié)果顯示,諾卡氏菌乳腺內(nèi)感染能引起小鼠乳腺的慢性炎癥反應(yīng),伴隨充血、水腫、炎性細(xì)胞浸潤、淋巴組織增生和壞死。同時(shí),小鼠出現(xiàn)采食量下降、被毛逆立和反應(yīng)遲鈍等臨床癥狀。牛乳腺上皮細(xì)胞感染試驗(yàn)結(jié)果顯示,諾卡氏菌菌絲能粘附和穿入細(xì)胞引起明顯的細(xì)胞變形,線粒體腫脹變性,染色質(zhì)凝集,核溶解,細(xì)胞膜破裂,最后細(xì)胞發(fā)生壞死。DNA ladder和AnnexinV/PI染色結(jié)果顯示,N.cyriacigeorgica能誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生凋亡;進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)細(xì)胞線粒體膜電位降低,線粒體細(xì)胞色素c釋放量升高,Bcl-2mRNA表達(dá)量下降,BaxmRNA表達(dá)量上升,同時(shí)caspase-9和caspase-3的蛋白表達(dá)量升高。上述結(jié)果表明,N.cyriacigeorgica可以同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和壞死;線粒體-caspase信號(hào)通路參與諾卡氏菌誘導(dǎo)的牛乳腺上皮細(xì)胞凋亡。細(xì)胞炎性因子表達(dá)量檢測(cè)結(jié)果顯示,N.cyriacigeorgica能促進(jìn)牛乳腺上皮細(xì)胞中多種促炎性細(xì)胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-12和IL-18)mRNA表達(dá)量的升高;同時(shí)伴隨模式識(shí)別受體(TLR2 和 TLR4)和相關(guān)信號(hào)分子(NLRP3、ASC 和 caspase-1)mRNA 表達(dá)量升高。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示IκB-α呈降解趨勢(shì),磷酸化NF-κB-p65、NLRP3和caspase-1表達(dá)呈升高趨勢(shì)。以上結(jié)果提示牛乳腺上皮細(xì)胞可能通過TLR2和TLR4識(shí)別諾卡氏菌,激活NF-κB信號(hào)通路,從而調(diào)控細(xì)胞炎性反應(yīng)。NLRP3表達(dá)量的升高提示N.cyriacigeorgica也可能通過NLRP3炎性體激活caspase-1,促進(jìn)IL-1β和IL-18產(chǎn)生,繼而引發(fā)細(xì)胞焦亡。綜上所述,諾卡氏菌的致病機(jī)制包括以下三點(diǎn):(1)諾卡氏菌可粘附和侵入乳腺上皮細(xì)胞,引起細(xì)胞損傷;(2)諾卡氏菌可通過線粒體-caspase途徑誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生凋亡;(3)諾卡氏菌感染誘導(dǎo)牛乳腺細(xì)胞中多種促炎性細(xì)胞因子的高表達(dá)。
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【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S858.23

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Candida Abreu;Nuno Rocha-Pereira;António Sarmento;Fernando Magro;;Nocardia infections among immunomodulated inflammatory bowel disease patients:A review[J];World Journal of Gastroenterology;2015年21期

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本文編號(hào)：1585741