本文關(guān)鍵詞：犬心絲蟲(chóng)MTFP抗原定位及Dot-ELISA和膠體金試紙條檢測(cè)方法的建立　出處：《吉林大學(xué)》2016年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：犬惡絲蟲(chóng)病(Heartworm disease)又名犬心絲蟲(chóng)病,是由犬惡絲蟲(chóng)(Dirofilaria immitis)簡(jiǎn)稱(chēng)犬心絲蟲(chóng)寄生于犬右心室及肺動(dòng)脈而引起的疾病,偶爾也寄生于腹腔、眼前庭、皮下等部位,其傳播媒介為吸血昆蟲(chóng),呈世界性分布,對(duì)犬、貓和野生動(dòng)物危害嚴(yán)重。感染犬惡絲蟲(chóng)的動(dòng)物血液內(nèi)含有犬心絲蟲(chóng)的幼蟲(chóng)-微絲蚴,微絲蚴經(jīng)蚊類(lèi)傳播,甚至可感染人,導(dǎo)致肺部結(jié)節(jié)。犬心絲蟲(chóng)病在我國(guó)分布較為廣泛,一些地區(qū)的流行病學(xué)調(diào)查研究顯示,該病的感染率可達(dá)40%以上。但是目前缺乏快速、便捷適用于臨床現(xiàn)場(chǎng)的檢測(cè)方法。因此建立一種特異、敏感、快速的免疫學(xué)診斷方法對(duì)該病的診斷及預(yù)防具有十分重要的意義。本研究利用本實(shí)驗(yàn)室從犬心絲蟲(chóng)c DNA文庫(kù)篩選獲得的犬心絲蟲(chóng)特異的MTFP基因重組蛋白作為免疫抗原,制備單克隆抗體,之后對(duì)MTFP基因蛋白抗原進(jìn)行定位。利用純化的犬心絲蟲(chóng)MTFP重組蛋白作為包被抗原建立Dot-ELISA檢測(cè)方法,并作為T(mén)線劃線抗原建立膠體金試紙條檢測(cè)方法,以期為犬心絲蟲(chóng)病診斷提供快速簡(jiǎn)便的方法。1、抗犬心絲蟲(chóng)MTFP蛋白單克隆抗體的制備:本研究以犬心絲蟲(chóng)MTFP重組蛋白為免疫抗原對(duì)BALB/c小鼠進(jìn)行免疫,取其脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合,經(jīng)篩選得到5株陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株(編號(hào)分別為7號(hào)、8號(hào)、11號(hào)、16號(hào)和20號(hào))。對(duì)其進(jìn)行亞類(lèi)鑒定,其中1株(11號(hào))為Ig G1亞型、2株(8號(hào)和16號(hào))為Ig G2a亞型、2株(7號(hào)和20號(hào))為Ig M亞型。利用親和層析法對(duì)16號(hào)株進(jìn)行純化,單克隆抗體輕鏈、重鏈清晰可見(jiàn),純化效果良好,經(jīng)間接ELISA檢測(cè),其腹水抗體效價(jià)為2×105。2、MTFP基因蛋白在犬心絲蟲(chóng)的定位:利用抗犬心絲蟲(chóng)MTFP蛋白16號(hào)株單克隆抗體,通過(guò)激光掃描共聚焦顯微鏡對(duì)心絲蟲(chóng)MTFP蛋白抗原進(jìn)行蟲(chóng)體定位,發(fā)現(xiàn)MTFP基因蛋白表達(dá)于成蟲(chóng)蟲(chóng)體的肌層。3、犬心絲蟲(chóng)Dot-ELISA檢測(cè)方法的建立:以犬心絲蟲(chóng)MTFP重組蛋白為抗原建立犬心絲蟲(chóng)Dot-ELISA檢測(cè)方法。通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件,確定了最佳抗原包被量為0.5μg/片、最佳待檢血清稀釋度為1:50、最佳酶標(biāo)抗體稀釋度為1:4000。所建立的Dot-ELISA方法敏感性為1:200,且與犬等孢球蟲(chóng)陽(yáng)性血清、犬蛔蟲(chóng)陽(yáng)性血清沒(méi)有交叉反應(yīng)。應(yīng)用所建立的Dot-ELISA方法檢測(cè)吉林省白城市62份犬血清,結(jié)果檢出3份陽(yáng)性樣本,陽(yáng)性率為4.8%。4、犬心絲蟲(chóng)膠體金檢測(cè)試紙條的研制:利用犬心絲蟲(chóng)MTFP重組蛋白建立了犬心絲蟲(chóng)膠體金試紙條檢測(cè)方法。經(jīng)過(guò)一系列試驗(yàn)確定了硝酸纖維素膜為Millipore 135s、金標(biāo)墊為玻璃纖維RB45、樣品墊為玻璃纖維SB08、T線蛋白最佳包被濃度為1mg/m L、C線抗體最佳包被濃度為0.5mg/m L。所制備的膠體金試紙條最低檢出限為1:8,穩(wěn)定性試驗(yàn)表明試紙條至少可室溫存放2個(gè)月,重復(fù)性良好,且與犬等孢球蟲(chóng)陽(yáng)性血清、犬蛔蟲(chóng)陽(yáng)性血清沒(méi)有交叉反應(yīng)。應(yīng)用所制備的膠體金試紙條檢測(cè)吉林省白城市62份犬血清,結(jié)果檢出4份陽(yáng)性樣本,陽(yáng)性率為6.4%。從而為犬心絲蟲(chóng)感染的檢測(cè)提供了新的方法。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S852.7

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1 金彩虹,趙守全,吳樹(shù)康,楊文平;犬心絲蟲(chóng)病的診治[J];山東畜牧獸醫(yī);2001年04期

2 喻峗,余慧,林觀一;犬心絲蟲(chóng)病的診治[J];四川畜牧獸醫(yī);2002年07期

3 陳紅英,林遠(yuǎn)青,歐海濤;犬心絲蟲(chóng)病的診斷與治療[J];中國(guó)獸醫(yī)科技;2003年12期

4 張中峰,王俊杰;犬心絲蟲(chóng)病的治療[J];山東畜牧獸醫(yī);2003年01期

5 杜曉鵬;王維;張叢林;;犬心絲蟲(chóng)病[J];警犬;2004年05期

6 Katie Racek-Peters;;養(yǎng)寵物的建議：犬心絲蟲(chóng)病的預(yù)防[J];環(huán)球?qū)櫸锟萍?2008年03期

7 劉佩紅;沈莉萍;龔國(guó)華;;犬心絲蟲(chóng)病的診斷與防治[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年11期

8 路群超;;犬心絲蟲(chóng)病的診治[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2009年20期

9 李越塹;;犬心絲蟲(chóng)病的診療[J];浙江畜牧獸醫(yī);2010年04期

10 葉青華;陳濤;;四川省工作犬心絲蟲(chóng)感染率的調(diào)查[J];四川畜牧獸醫(yī);2012年03期

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1 宋立新;唐延波;孫希金;鄒傳森;;犬心絲蟲(chóng)病的綜合防治[A];全國(guó)獸醫(yī)外科學(xué)第13次學(xué)術(shù)研討會(huì)、小動(dòng)物醫(yī)學(xué)第1次學(xué)術(shù)研討會(huì)暨奶牛疾病第3次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2006年

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1 晨風(fēng);定期投藥 人犬共健康[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2008年

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1 姜鑫;犬心絲蟲(chóng)MTFP抗原定位及Dot-ELISA和膠體金試紙條檢測(cè)方法的建立[D];吉林大學(xué);2016年

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1 何宏全;西安地區(qū)警犬心絲蟲(chóng)病的診斷與防治研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2004年

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本文編號(hào)：1311009