本文關(guān)鍵詞：郁金散半仿生提取物對急、慢性腸炎的保護(hù)作用及其機(jī)制研究

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【摘要】：郁金散是中(獸)醫(yī)臨床常用經(jīng)典方藥,主治急慢性腸炎、腹瀉、傳染性發(fā)熱、肺炎、肝炎等,療效顯著,現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其具有抗炎、抗菌及解熱鎮(zhèn)痛的作用,但對其治療腸炎作用的確切機(jī)制尚無深入研究。本研究采用均勻設(shè)計法優(yōu)選郁金散半仿生提取的最佳工藝條件,對郁金散半仿生提取物(Semi-bionic Extraction of Compound Turmeric,SET)、醇提物(Alcohol Extraction,AE)及水提物(Water Extraction,WE)進(jìn)行平行對照實(shí)驗(yàn),用化學(xué)指標(biāo)結(jié)合藥效學(xué)指標(biāo)綜合評價,確定郁金散的最佳提取方法。研究SET的急性毒性、解熱和抗炎鎮(zhèn)痛作用,并采用葡聚糖硫酸鈉(Dextran Sulfate Sodium,DSS)誘導(dǎo)建立大鼠急性腸炎(Acute Enteritis,AE)及慢性腸炎(Chronic Enteritis,CE)模型,觀察SET對急、慢性腸炎的治療作用及其機(jī)制,為中藥郁金散的開發(fā)與應(yīng)用提供理論依據(jù),主要研究結(jié)果如下:1、采用均勻設(shè)計法研究郁金散的半仿生提取工藝,以黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃素、姜黃素、芍藥苷和梔子苷含量為指標(biāo),并對提取物總黃酮、總生物堿、總蒽醌進(jìn)行檢測,綜合評判工藝參數(shù),優(yōu)選出郁金散半仿生提取的最佳條件,結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際,確定其工藝參數(shù)為:3煎用水pH依次為:2.0,7.0和9.0;提取時間依次為:2,1.5和1.5h。此方法可控性強(qiáng)、操作簡單、穩(wěn)定性較好。2、以干浸膏得率、總蒽醌、總黃酮、總生物堿為化學(xué)指標(biāo),以抗炎效應(yīng)(小鼠耳殼腫脹試驗(yàn))和抗菌效應(yīng)(體外大腸桿菌、綠膿桿菌、金葡萄球菌及白色念珠菌抑菌試驗(yàn))為藥效學(xué)指標(biāo),對SET、AE及WE進(jìn)行平行對照實(shí)驗(yàn),比較郁金散不同方法提取物的作用效果。結(jié)果表明三種不同方法的提取液的作用效力順序?yàn)?SETAEWE,表明用化學(xué)指標(biāo)結(jié)合藥效學(xué)指標(biāo)綜合評價,優(yōu)選出的郁金散半仿生工藝可行,且提半仿生取法優(yōu)于傳統(tǒng)的水提及醇提法。3、SET對小鼠經(jīng)口給藥LD50為4.20g/kg,置信系數(shù)a=0.05時的置信區(qū)間為3.63g/kg≤LD50≤4.56 g/kg;SET對二甲苯致小鼠耳腫脹試驗(yàn)及角叉菜膠致小鼠足跖腫脹急性炎癥反應(yīng)具有明顯抑制作用,對干酵母及對2,4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱具有一定的解熱作用,且呈現(xiàn)量效關(guān)系;對冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)及熱刺激致小鼠痛反應(yīng)試SET具有一定的鎮(zhèn)痛作用。4、DSS誘導(dǎo)建立大鼠AE模型,動態(tài)監(jiān)測模型大鼠消化功能和組織形態(tài)的變化,結(jié)果顯示SET干預(yù)后大鼠體重及24小時攝食量均有所恢復(fù);SET可顯著降低DAI值及結(jié)腸W/D比值,提示SET可改善模型大鼠消化功能,減輕腸道水腫;血清促炎及抗炎因子檢測結(jié)果顯示SET干預(yù)后模型大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8含量降低,IL-10含量升高,結(jié)腸組織MDA、MPO含量降低,DAO、GSH-Px含量升高;給藥后第7d,模型大鼠CMDI及HPS評分明顯高于正常對照組,經(jīng)SET干預(yù)后,各組CMDI及HPS評分值均有不同程度的減小;組織病理學(xué)觀察顯示模型大鼠結(jié)腸隱窩和上皮結(jié)構(gòu)消失,腺體多數(shù)不完整,炎癥細(xì)胞廣泛浸潤,水腫和出血明顯,SET高劑量組大鼠結(jié)腸組織炎性細(xì)胞的浸潤明顯減少,水腫和充血明顯減輕,SET低劑量組大鼠結(jié)腸組織依然有大量的炎性細(xì)胞浸潤和出血點(diǎn),但比模型組有輕微的好轉(zhuǎn);RT-PCR檢測結(jié)果顯示,SET干預(yù)后模型大鼠NF-кB-p65mRNA及ICAM-1mRNA含量降低;Western bloting分析顯示,SET干預(yù)后模型大鼠結(jié)腸組織NFκB-p65及ICAM-1表達(dá)降低。提示SET可作為急性腸炎的有效治療物質(zhì)。5、DSS誘導(dǎo)建立大鼠CE模型,研究SET對CE模型大鼠的治療作用,結(jié)果顯示,SET干預(yù)后模型大鼠體重及24小時攝食量明顯增加,模型大鼠DAI值及結(jié)腸W/D比值明顯降低;采用擴(kuò)張球囊對CE大鼠進(jìn)行結(jié)直腸刺激,結(jié)果顯示SET干預(yù)后在第21d、31d、41d及51d,SET高劑量組大鼠腹部撤回反射(Abdominal withDrawal Reflex,AWR)評分明顯降低,第42d及51d,SET低劑量組大鼠AWR值明顯降低,結(jié)果提示SET可緩解DSS引起的CE大鼠內(nèi)臟痛敏;SET干預(yù)后模型大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8含量明顯降低,IL-10含量明顯升高,結(jié)腸組織MDA、MPO含量顯著降低,DAO、GSH-Px含量顯著升高;提示SET亦可作為治療CE的有效治療物質(zhì)。
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S853.74
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本文編號：1267428