本文關(guān)鍵詞：鞣花酸與GDC-0941對(duì)乳腺癌治療的協(xié)同作用及機(jī)制探討

  更多相關(guān)文章： 鞣花酸 乳腺癌 PI3K/AKT/mTOR GDC-0941 聯(lián)合用藥

【摘要】：目的:乳腺癌是女性高發(fā)的惡性腫瘤之一,也是患病人數(shù)(女性中)最多,病死率最高的腫瘤,而且其患病人數(shù)呈持續(xù)增長(zhǎng)趨勢(shì)。不僅嚴(yán)重影響人們生存質(zhì)量而且給世界衛(wèi)生系統(tǒng)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。乳腺癌的發(fā)病原因非常復(fù)雜,包括遺傳因素、激素調(diào)節(jié)異常和環(huán)境因素影響等。傳統(tǒng)乳腺癌的治療方法有手術(shù)、放療和化療等。而隨著分子生物學(xué)研究的進(jìn)展,分子靶向治療已成為繼傳統(tǒng)治療之后的一種全新的生物治療模式。但是在針對(duì)乳腺癌的治療時(shí),若只針對(duì)單一靶點(diǎn)所設(shè)計(jì)的靶向藥物,那在臨床應(yīng)用中往往容易產(chǎn)生耐受性以及較大的毒副作用,從而無法較好的滿足臨床的需要。因此將多種藥物聯(lián)合應(yīng)用,在提高化療藥物藥效的同時(shí),也提高患者的生存質(zhì)量,因此也成為腫瘤治療的熱點(diǎn)方向之一。鞣花酸(Ellagic Acid)是一種存在于水果蔬菜的多酚類植物化學(xué)物質(zhì),不僅具有天然化學(xué)物質(zhì)的屬性,而且鞣花酸還具有抗腫瘤,抗氧化,抗纖維化等特性。對(duì)于鞣花酸的抗腫瘤研究在不斷深入,已在多種腫瘤的研究與治療得到體現(xiàn),如皮膚癌,食道癌,結(jié)腸癌,乳腺癌和胰腺癌等。鞣花酸抑制腫瘤作用主要表現(xiàn)在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡、抑制細(xì)胞周期、抑制血管生成、以及抑制癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移等方面。但是對(duì)于其具體發(fā)揮作用的機(jī)制,尚不甚明確。磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)信號(hào)通路與乳腺癌發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系已被逐漸闡明,而以PI3K作為治療靶點(diǎn)的研究也日益成熟;新型PI3K小分子抑制劑GDC-0941,是一種能特異性地抑制p110阿爾法催化亞基的小分子藥物,其現(xiàn)正在美國(guó)處于一期臨床試驗(yàn)階段。本文就鞣花酸與化療藥物GDC-0941聯(lián)合使用觀察其藥效的發(fā)揮情況并探討其作用機(jī)制。方法:(1)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)鞣花酸與GDC-0941聯(lián)合用藥抑制人乳腺癌細(xì)胞的增殖。(2)利用Annexin V/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡率。(3)Western blot法檢測(cè)凋亡蛋白的表達(dá)。(4)Western blot法檢測(cè)PI3K/AKT/m TOR下游通路上S6RP、4EBP1磷酸化程度的變化。(5)劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移率的改變。(6)小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)聯(lián)合用藥對(duì)腫瘤細(xì)胞肺部轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果:(1)30?M鞣花酸和1?M GDC-0941作用于乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231,SKBR3和SUM159之后表現(xiàn)出較強(qiáng)的協(xié)同抑制細(xì)胞增殖作用,并表現(xiàn)出時(shí)間依賴性。(2)對(duì)MDA-MB-231,SKBR3和SUM159三種乳腺癌細(xì)胞,鞣花酸能顯著增加GDC-0941誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,其具體表現(xiàn)為早期凋亡的發(fā)生和凋亡蛋白c-PARP的出現(xiàn)和高表達(dá)。(3)鞣花酸與GDC-0941聯(lián)合使用所產(chǎn)生的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用,主要是通過抑制PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路中m TOR的磷酸化實(shí)現(xiàn),具體表現(xiàn)為降低S6RP和4EBP1的活化。(4)鞣花酸和GDC-0941聯(lián)合作用可有效的抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移。(5)體內(nèi)試驗(yàn)中,鞣花酸和GDC-0941的聯(lián)合使用可有效抑制癌細(xì)胞的肺部轉(zhuǎn)移。結(jié)論:(1)鞣花酸與GDC-0941同時(shí)作用于三種乳腺癌細(xì)胞,表現(xiàn)出較強(qiáng)的協(xié)同抑制細(xì)胞增殖作用,并表現(xiàn)出時(shí)間依賴性。(2)鞣花酸能顯著增加GDC-0941誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,其具體表現(xiàn)為早期凋亡的發(fā)生和凋亡蛋白c-PARP的出現(xiàn)和高表達(dá)。(3)協(xié)同抑制腫瘤、增強(qiáng)凋亡作用主要是通過抑制PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路中m TOR的磷酸化實(shí)現(xiàn)。(4)其聯(lián)合作用可有效的抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：鞣花酸 乳腺癌 PI3K/AKT/mTOR GDC-0941 聯(lián)合用藥
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-20
• 1.實(shí)驗(yàn)儀器和材料13-14
• 1.1 研究對(duì)象13-14
• 1.2 儀器與試劑14
• 2.方法14-20
• 2.1 腫瘤細(xì)胞的常規(guī)培養(yǎng)14-15
• 2.2 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) (Proliferation assay)15
• 2.3 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn) (Apoptosis assay)15-16
• 2.4 克隆形成實(shí)驗(yàn) (Colony formation assay)..16
• 2.5 蛋白印跡分析 (Western blot)16-19
• 2.5.1 細(xì)胞全蛋白提取16-17
• 2.5.2 BCA法蛋白含量檢測(cè)17-18
• 2.5.3 蛋白變性18
• 2.5.4 SDS-PAGE電泳灌膠、上樣及電泳18
• 2.5.5 轉(zhuǎn)膜18
• 2.5.6 封閉與抗體孵育18-19
• 2.5.7 ECL顯色反應(yīng)19
• 2.6 劃痕實(shí)驗(yàn) (Scratching assay)19
• 2.7 FVB小鼠乳腺癌細(xì)胞肺部轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn) (Lung transferringassay )19-20
• 數(shù)據(jù)分析20
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-34
• 1. 顯微鏡下的人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231,SKBR3和SUM15920-21
• 2. 鞣花酸和GDC-0941對(duì)三種乳腺癌細(xì)胞系表現(xiàn)出較強(qiáng)的協(xié)同抑制增殖作用21-24
• 3. 鞣花酸可明顯增強(qiáng)GDC-0941誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞的凋亡能力24-26
• 4. 鞣花酸促進(jìn)GDC-0941誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通路相關(guān)蛋白c-PARP的表達(dá)26-28
• 5. 鞣花酸和GDC-0941聯(lián)合進(jìn)一步抑制PI3K信號(hào)通路下游相關(guān)蛋白的表達(dá).28-30
• 6. 鞣花酸與GDC-0941聯(lián)合使用可協(xié)同抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移.30-32
• 7. 鞣花酸協(xié)同GDC-0941治療小鼠，對(duì)腫瘤細(xì)胞體內(nèi)肺部轉(zhuǎn)移有明顯的抑制作用32-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 綜述42-53
• （一）前言42-43
• （二）腫瘤的藥物治療43-44
• （三）植物化學(xué)物鞣花酸44-48
• （四）結(jié)論與展望48
• （五）參考文獻(xiàn)48-53
• 附錄53-54
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況54-55
• 致謝55-56

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本文編號(hào)：676681