本文關(guān)鍵詞：黑皮質(zhì)素受體-3與黑皮質(zhì)素受體-4基因敲除大鼠的代謝表型研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肥胖是指機體由于長期的能量攝入超過消耗而引起能量平衡紊亂,從而導(dǎo)致機體過多的能量以脂肪的形式儲存在體內(nèi),且這種脂肪的聚集可能引起機體生理功能出現(xiàn)異�；驖摲T發(fā)其他疾病的一種病理狀態(tài)。肥胖已經(jīng)是一個全球性的健康問題�，F(xiàn)階段,發(fā)達國家的肥胖人數(shù)(體重指數(shù)BMI30kg/m2)急劇上升,這種現(xiàn)象如今在發(fā)展中國家也開始出現(xiàn)。肥胖會對身體多個器官造成影響,引起機體代謝紊亂,誘發(fā)2型糖尿病、心血管疾病等慢性病。目前,世界衛(wèi)生組織(World Health Organization, WHO)指出肥胖已經(jīng)成為了世界上危害公共健康問題之一。在科研領(lǐng)域,了解肥胖的機理及如何引起代謝綜合征等相關(guān)的研究越來越受到人們的關(guān)注,這就需要尋找一個適合的動物模型。下丘腦黑皮質(zhì)素系統(tǒng)在體重維持和能量穩(wěn)態(tài)中起著非常重要的作用。它在機體內(nèi)發(fā)揮著整合連接代謝狀態(tài)與控制食欲的神經(jīng)元回路及控制代謝的自主神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)之間的信號的作用。黑皮質(zhì)素受體是G蛋白偶聯(lián)受體家族中的成員。目前發(fā)現(xiàn)黑皮質(zhì)素受體一共有5種,MC1R-MC5R。MC3R和MC4R這兩個中樞黑皮質(zhì)素受體在調(diào)節(jié)能量平衡方面發(fā)揮著重要的作用。MC3R在能量穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮著一定調(diào)節(jié)作用,而MC4R通過控制食欲調(diào)節(jié)能量攝入和能量消耗,并且MC4R突變也是導(dǎo)致人類單基因肥胖的主要原因。與小鼠相比較而言,大鼠模型更適合模擬人類的一些疾病和進行毒理、行為學(xué)及營養(yǎng)學(xué)的研究。本課題主要利用我們實驗室采用CRISPR/Cas9技術(shù)對大鼠基因進行高效敲除獲得的首建MC3R、MC4R單基因敲除和MC3R、MC4R雙基因敲除大鼠。研究MC3R、MC4R單基因敲除和雙基因敲除在大鼠表型的差異,以期分析這些模型在肥胖、糖尿病等代謝性疾病研究中的應(yīng)用前景。通過對野生型和基因突變型大鼠的表型比較,我們發(fā)現(xiàn)MC3R基因突變型大鼠的腹腔總脂肪比例上升,腎周脂肪細胞體積增大,血液中脂質(zhì)含量升高,表現(xiàn)出一定的脂代謝異常,但無明顯糖代謝異常。MC4R單基因敲除大鼠和MC3R、MC4R雙基因敲除大鼠則同時表現(xiàn)出明顯的脂質(zhì)代謝和葡萄糖糖代謝異常,如體重明顯升高,血脂升高,血糖升高,糖耐量異常等一系列代謝紊亂癥狀。并且MC3R、MC4R雙基因敲除大鼠的表型相對于MC4R單基因敲除大鼠要出現(xiàn)的更早。初步認為MC4R單基因敲除大鼠和MC3R、MC4R雙基因敲除大鼠可以作為研究肥胖和由肥胖引起的2型糖尿病模型用于將來的實驗研究。
【關(guān)鍵詞】：大鼠 基因敲除 肥胖 MC3R MC4R
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R589.2
【目錄】：

• 內(nèi)容摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 引言12-17
• 1.1 肥胖的定義及其發(fā)病因素12-13
• 1.2 肥胖的危害及治療13-14
• 1.3 中樞黑皮質(zhì)素系統(tǒng)的研究進展14
• 1.4 黑皮質(zhì)素受體(melanocortin receptors,MCRs)的研究進展14-16
• 1.5 本課題研究的目的和意義16-17
• 第二章 材料與方法17-32
• 2.1 實驗材料17-22
• 2.1.1 實驗動物17
• 2.1.2 主要試劑與試劑盒17-18
• 2.1.3 實驗儀器18-20
• 2.1.4 主要實驗耗材20
• 2.1.5 常用試劑配制20-22
• 2.2 實驗方法22-32
• 2.2.1 大鼠基因型鑒定22-25
• 2.2.2 大鼠血糖測量方法25-26
• 2.2.3 大鼠口服葡萄糖耐量實驗(Oral Glucose Tolerance Test,OGTT)26
• 2.2.4 大鼠胰島素耐量實驗(Insulin Tolerance Test, ITT)26
• 2.2.5 大鼠眼眶取血26-27
• 2.2.6 HE染色27-30
• 2.2.7 油紅O染色30
• 2.2.8 大鼠飲食量的測量方法30
• 2.2.9 大鼠飲水量的測量方法30-31
• 2.2.10 大鼠體重測量方法31
• 2.2.11 大鼠體長測量方法31
• 2.2.12 大鼠腰圍測量方法31
• 2.2.13 大鼠血液生化指標的檢測31
• 2.2.14 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析31-32
• 第三章 實驗結(jié)果與討論32-71
• 3.1 MC3R與MC4R基因敲除對大鼠個體表型的影響32-38
• 3.1.1 對攝食量、飲水量的影響32-35
• 3.1.2 對體重、腰圍、體長和Lee's指數(shù)的影響35-38
• 3.2 MC3R與MC4R基因敲除對大鼠血液中生化指標的影響38-63
• 3.2.1 對血清中甘油三酯、總膽固醇、脂蛋白膽固醇及游離脂肪酸的影響38-48
• 3.2.2 對血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、尿酸和肌酐的影響48-56
• 3.2.3 對血清中胰島素、瘦素和血漿中糖化血紅蛋白的影響56-60
• 3.2.4 MC3R與MC4R基因敲除對大鼠血口服葡萄糖耐量的影響60-63
• 3.3 MC3R與MC4R基因敲除對大鼠組織器官的影響63-71
• 3.3.1 對大鼠臟器系數(shù)的影響63-66
• 3.3.2 對大鼠脂肪組織和肝臟組織的影響66-71
• 全文總結(jié)與討論71-76
• 1. 總結(jié)71-73
• 2. 討論73-75
• 3. 展望75-76
• 參考文獻76-83
• 附錄Ⅰ 縮略詞表83-84
• 附錄Ⅱ 攻讀碩士學(xué)位期間所獲學(xué)術(shù)成果84-85
• 致謝85-86

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