目的:默克爾細(xì)胞在皮膚的觸覺傳導(dǎo)機(jī)制中起著重要的作用。雪旺氏細(xì)胞(SCs)是創(chuàng)傷后神經(jīng)纖維再生的重要細(xì)胞。外泌體中的各種因子可以促進(jìn)創(chuàng)面愈合。觸覺功能障礙是否與全層皮膚缺損中默克爾細(xì)胞(MCs)缺失或Piezo2離子通道功能障礙有關(guān),外泌體又是否可以促進(jìn)創(chuàng)面觸覺的恢復(fù),其分子機(jī)制尚不清楚。本研究旨在通過MCs中Piezo2離子通道的功能來確定雪旺氏來源的外泌體是否在全層皮膚創(chuàng)面觸覺恢復(fù)中發(fā)揮作用。方法:1)采用消化法從與動物模型同基因型新生SD大鼠皮膚內(nèi)和坐骨神經(jīng)內(nèi)分別提取、培養(yǎng)MCs和SCs,采用免疫熒光法及WB測定MCs中CK20及Piezo2和SCs中S-100、GFAP及P75的表達(dá)。ELISA法檢測培養(yǎng)至第0d、2d、4d、6d的MCs中分泌CGRP情況。2)提取SCs和MCs(control組)外泌體分別與MCs共培養(yǎng),分為三組:MCs組、MCs+exosome+control組和MCs+exo-SCs組;提取三組中蛋白檢測Piezo2的含量并在RNA水平上檢測Piezo2 m RNA的表達(dá)。用WB法及q PCR法檢測MCs組、MCs+SCs組及MCs+SCs+GW4869...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.免疫熒光檢測MCs標(biāo)志性蛋白CK20：免疫熒光檢測CK20蛋白在MCs和成纖維細(xì)胞中的相對表達(dá)（標(biāo)尺=50μm）

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文譚昊362結(jié)果2.1MCs和SCs的培養(yǎng)鑒定。2.1.1MCs的培養(yǎng)鑒定：采用酶消化法從新生SD大鼠體內(nèi)獲得MCs。用皮膚成纖維細(xì)胞作為對照組，將培養(yǎng)6d的Merkel細(xì)胞和成纖維細(xì)胞爬片做CK20免疫熒光檢測：免疫熒光成像顯示CK20在MCs中呈強(qiáng)陽性，....

圖2.WB檢測在MCs標(biāo)志性蛋白CK20：CK20蛋白在MCs和成纖維細(xì)胞中的相對表達(dá)，GAPDH作為內(nèi)參(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文譚昊37圖2.WB檢測在MCs標(biāo)志性蛋白CK20：CK20蛋白在MCs和成纖維細(xì)胞中的相對表達(dá)，GAPDH作為內(nèi)參(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)。Piezo2離子通道是默克爾細(xì)胞表達(dá)的典型的觸覺感受器。為....

圖3.WB和qPCR檢測Piezo2在MCs和成纖維細(xì)胞中的相對表達(dá)：A.Piezo2蛋白在MCs和成

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文譚昊37圖2.WB檢測在MCs標(biāo)志性蛋白CK20：CK20蛋白在MCs和成纖維細(xì)胞中的相對表達(dá)，GAPDH作為內(nèi)參(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)。Piezo2離子通道是默克爾細(xì)胞表達(dá)的典型的觸覺感受器。為....

圖4.ELISA和檢測MCs和成纖維細(xì)胞中分泌的CGRP的含量：(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文譚昊38纖維細(xì)胞中的相對表達(dá)，GAPDH作為內(nèi)參；B.Piezo2的mRNA在MCs和成纖維細(xì)胞中的相對表達(dá)(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=3pergroup)。Merkel細(xì)胞可分泌降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)，參與調(diào)節(jié)組織....

本文編號：3923393