基因編輯技術(shù)因其可以直接對(duì)基因組進(jìn)行改造而被廣泛應(yīng)用于單基因遺傳病治療的研究中。β-地中海貧血是由β-珠蛋白基因突變?cè)斐傻?通過提高紅細(xì)胞內(nèi)的γ-珠蛋白的表達(dá)可以減輕β-地中海貧血患者的癥狀。有研究表明,利用慢病毒載體遞送CRISPR/Cas9系統(tǒng)靶向CD34⁺造血干/祖細(xì)胞中γ-珠蛋白基因的啟動(dòng)子區(qū),模擬遺傳性胎兒血紅蛋白持續(xù)存在癥病人中天然存在的γ-珠蛋白基因啟動(dòng)子區(qū)-102到-114之間13bp的缺失,可以破壞轉(zhuǎn)錄抑制因子BCL11A在γ-珠蛋白基因啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合位點(diǎn),進(jìn)而提高細(xì)胞內(nèi)γ-珠蛋白的表達(dá)水平,但是這種方法并不利于臨床轉(zhuǎn)化,一是因?yàn)槁《据d體在人的造血干細(xì)胞中的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率低,二是因?yàn)槁《据d體的隨機(jī)整合會(huì)有潛在致瘤風(fēng)險(xiǎn),而且Cas9蛋白的持續(xù)表達(dá)可能增加脫靶風(fēng)險(xiǎn)。為了能夠創(chuàng)建直接用于臨床的β-地中海貧血基因編輯基因治療的技術(shù)平臺(tái),在本課題中,我們探究了Cas9蛋白在人的CD34⁺造血干/祖細(xì)胞中高效編輯的條件。我們發(fā)現(xiàn),通過合成針對(duì)γ-珠蛋白基因啟動(dòng)子區(qū)-102到-114位點(diǎn)的sgRNAs,并對(duì)其兩端進(jìn)行了化學(xué)修飾,利用電穿孔將...

【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1基因治療的兩種策略（源自參考文獻(xiàn)10）

華東師范大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文2應(yīng)并導(dǎo)致死亡7，引起人們對(duì)病毒載體免疫原性的重視。2003年，Salima團(tuán)隊(duì)的報(bào)告指出10名X-連鎖重癥聯(lián)合免疫缺陷癥的兒童在接受基因治療3年后，其中2名兒童因γ-逆轉(zhuǎn)錄載體隨機(jī)插入原癌基因而罹患T細(xì)胞白血病8，這是最早的關(guān)于病毒載體的隨機(jī)整....

圖2核酸酶技術(shù)工作原理（源自參考文獻(xiàn)18）

華東師范大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文4基因治療研究的熱點(diǎn)。2基因編輯技術(shù)2.1基因編輯技術(shù)的發(fā)展我們把基于核酸酶發(fā)展而來的基因治療稱為新興的基因治療，其特點(diǎn)是直接操縱基因組DNA以達(dá)到治療疾病的目的。它的作用原理是利用核酸酶使DNA在特定位置產(chǎn)生雙鏈斷裂（doublestrandb....

圖3CRISPR/Cas系統(tǒng)的分類（源自參考文獻(xiàn)33,34）

華東師范大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文6血友并杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良和酪氨酸尿癥等的基因治療中顯示出巨大的應(yīng)用前景。2016年，基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)開發(fā)的堿基編輯技術(shù)問世，可以在沒有模板、不產(chǎn)生雙鏈斷裂的情況下，對(duì)基因組上的單個(gè)堿基進(jìn)行替換，大大拓寬了基因編輯的應(yīng)用范圍32。2.2....

圖4第一類CRISPR的作用原理（源自參考文獻(xiàn)36）

華東師范大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文7在I型系統(tǒng)Cas6和crRNA結(jié)合組成一個(gè)支架（圖4），再與其他Cas蛋白形成一個(gè)叫Cascade的復(fù)合物，Cascade識(shí)別DNA上的PAM，crRNA負(fù)責(zé)與DNA上的堿基配對(duì)，然后招募Cas3切割非靶向鏈。在III型系統(tǒng)中，crRNA充當(dāng)一....

本文編號(hào)：3913495