火絨草是一種廣泛應(yīng)用于民間治療咳嗽、腎炎、尿道炎等炎癥疾病的中草藥,為深入研究火絨草抗炎作用,本課題首先用MTT實(shí)驗(yàn)及一氧化氮(NO)實(shí)驗(yàn)對(duì)火絨草提取物細(xì)胞毒性及抗炎活性進(jìn)行初篩,篩選得到抗炎活性高且細(xì)胞毒性小的火絨草提取物ent-kaur-15-en-17-al-18-oicacid(LL-3),課題進(jìn)一步探究其抗炎作用及機(jī)制,實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)LL-3通過(guò)減少氧化性物質(zhì)活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)生成,提高還原性物質(zhì)谷胱甘肽(GSH)及超氧化物歧化酶(SOD)活力減少氧化應(yīng)激的產(chǎn)生。RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)LL-3能顯著降低環(huán)氧合酶-2(COX-2)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、腫瘤死亡受體因子-α(TNF-α)促炎介質(zhì)及因子過(guò)表達(dá),為進(jìn)一步探究其信號(hào)通路,Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)P38、p-P38、NF-κB蛋白表達(dá)情況,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示LL-3顯著降低p-P38、NF-κB蛋白表達(dá),以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明LL-3可通過(guò)抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7氧化應(yīng)激,阻滯P38/MAPK、NF-κB信號(hào)通路激活從而降低COX-2、iNOS、TNF-α基因轉(zhuǎn)錄達(dá)到抗炎的目的。線粒體是產(chǎn)...

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)詞匯表
第一章 緒論
    1.1 慢性炎癥
    1.2 慢性炎癥機(jī)制
        1.2.1 氧化應(yīng)激
        1.2.2 炎癥信號(hào)通路
    1.3 阿爾茲海默癥
    1.4 AD發(fā)病機(jī)制
        1.4.1 Aβ蛋白級(jí)聯(lián)學(xué)說(shuō)
        1.4.2 氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)
        1.4.3 炎癥因子學(xué)說(shuō)
        1.4.4 線粒體功能障礙學(xué)說(shuō)
        1.4.5 細(xì)胞凋亡學(xué)說(shuō)
    1.5 火絨草
第二章 火絨草提取物抗炎作用機(jī)制研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 化合物
        2.1.3 試劑
        2.1.4 試劑配制
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)及凍存
        2.2.2 MTT法檢測(cè)火絨草提取物細(xì)胞毒性
        2.2.3 Giress Regant法初篩火絨草提取物抗炎活性
        2.2.4 ROS實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 GSH實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 MDA實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 SOD實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 MMP檢測(cè)
        2.2.9 RNA的提取與Real-time PCR
        2.2.10 Western Blot實(shí)驗(yàn)
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 火絨草提取物細(xì)胞毒性
        2.3.2 火絨草提取物降低LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞內(nèi)NO含量
        2.3.3 LL-3升高LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞MMP降低
        2.3.4 LL-3降低LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞ROS水平
        2.3.5 LL-3降低LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞內(nèi)MDA水平、升高SOD及GSH的水平
        2.3.6 LL-3降低LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞iNOS、COX-2、TNF-α過(guò)表達(dá)
        2.3.7 LL-3阻滯LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞P38/MAPK、NF-κB通路
    2.4 討論
第三章 化合物L(fēng)L-3神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞株
        3.1.2 化合物
        3.1.3 試劑
        3.1.4 試劑配制
        3.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)及凍存
        3.2.2 MTT法檢測(cè)化合物L(fēng)L-3細(xì)胞毒性
        3.2.3 MTT法檢測(cè)化合物L(fēng)L-3神經(jīng)保護(hù)作用
        3.2.4 ROS實(shí)驗(yàn)
        3.2.5 GSH實(shí)驗(yàn)
        3.2.6 MDA實(shí)驗(yàn)
        3.2.7 SOD實(shí)驗(yàn)
        3.2.8 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        3.2.9 DAPI染色
        3.2.10 Western Blot實(shí)驗(yàn)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 LL-3細(xì)胞毒性及減弱Aβ_25-35誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞毒性
        3.3.2 LL-3降低Aβ_25-35誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)ROS水平
        3.3.3 LL-3降低Aβ_25-35誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)MDA水平、升高SOD及GSH的水平
        3.3.4 LL-3升高Aβ_25-35誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞MMP降低
        3.3.5 LL-3削弱Aβ_25-35蛋白誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡
        3.3.6 LL-3阻滯Aβ_25-35誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞p53及NF-κB信號(hào)通路
        3.3.7 LL-3調(diào)節(jié)Aβ_25-35誘導(dǎo)的Bax、Cytoc、Cleaved-caspase 3、bcl-2蛋白表達(dá)
    3.4 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：3820455