結(jié)直腸癌(CRC)是全球范圍內(nèi)癌癥致死的第三大病因。在中國,結(jié)直腸癌是導(dǎo)致惡性腫瘤死亡的第四大原因。目前結(jié)直腸癌的主要治療手段為手術(shù)和化學(xué)療法相結(jié)合。但是,由于患者對化療藥物的抗藥性不僅降低了癌癥的治愈率,還給患者帶來了嚴(yán)重的不良預(yù)后。因此,開發(fā)安全、有效的新型抗癌藥物已是必然趨勢。天然化合物是抗癌新藥物的主要來源。杠柳苷元(Periplogenin,PPG)是一種從傳統(tǒng)中草藥香加皮中提取的天然化合物。目前,關(guān)于PPG誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究尚無報(bào)道。本研究通過MTT法檢測PPG對腫瘤細(xì)胞活性的影響。以人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞為例,通過TUNEL法、流式細(xì)胞術(shù)、蛋白免疫印跡(Western blot)、siRNA干擾等手段揭示了PPG誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制,結(jié)果包括以下四個(gè)方面:(1)PPG抑制腫瘤細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)HCT116細(xì)胞凋亡。MTT法檢測PPG對人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116、肝癌細(xì)胞HepG2、宮頸癌細(xì)胞Hela、乳腺癌細(xì)胞MCF7和正常細(xì)胞系-大鼠隱窩上皮IEC6細(xì)胞活性的影響,結(jié)果顯示PPG以時(shí)間和劑量依賴的方式抑制HCT116、HepG2、Hela和MCF7的增殖,...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 綜述
    1 癌癥及其治療方法
        1.1 癌癥概述
        1.2 結(jié)直腸癌
        1.3 結(jié)直腸癌的治療方法
    2 杠柳苷元
        2.1 天然產(chǎn)物概述
        2.2 細(xì)胞凋亡
        2.3 杠柳苷元
        2.4 杠柳苷元的研究進(jìn)展
    3 活性氧與細(xì)胞凋亡
        3.1 活性氧概述
        3.2 活性氧與細(xì)胞凋亡
    4 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細(xì)胞凋亡
        4.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激概述
        4.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路簡介
        4.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細(xì)胞凋亡
        4.4 ROS與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
    5 本論文研究的目的及意義
第二章 杠柳苷元對結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的影響
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 細(xì)胞系
            1.1.2 杠柳苷元
            1.1.3 主要試劑
            1.1.4 主要儀器
            1.1.5 試劑配制
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 杠柳苷元藥物配制
            1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.2.3 細(xì)胞復(fù)蘇與凍存
            1.2.4 MTT檢測細(xì)胞活性
            1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡(Annexin V-FITC/PI)
            1.2.6 TUNEL 染色
            1.2.7 蛋白免疫印跡(Western blot)
        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2 結(jié)果
        2.1 杠柳苷元顯著抑制腫瘤細(xì)胞活性
        2.2 杠柳苷元誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡
        2.3 杠柳苷元對腫瘤細(xì)胞中凋亡標(biāo)志蛋白表達(dá)的影響
    3 討論
第三章 杠柳苷元通過ROS途徑誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 主要試劑
            1.1.2 主要儀器
            1.1.3 溶劑配制
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測ROS水平變化
            1.2.3 MTT實(shí)驗(yàn)檢測抗氧化劑NAC對 HCT116 細(xì)胞增殖的影響
        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2 結(jié)果
        2.1 PPG對 HCT116 細(xì)胞中ROS水平的影響
        2.2 抗氧化劑NAC對腫瘤細(xì)胞活性的影響
        2.3 抗氧化劑NAC對杠柳苷元誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響
    3 討論
第四章 杠柳苷元通過ROS介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑
        1.2 RNAi序列
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2 結(jié)果
        2.1 杠柳苷元對腫瘤細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        2.2 特異siRNA干擾CHOP/JNK后對PPG誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響
        2.3 ROS是 PPG誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中ER應(yīng)激的上游信號
    3 討論
第五章 總結(jié)與展望
    1 總結(jié)
    2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡況及聯(lián)系方式



本文編號：3793512