目的:Leber遺傳性視神經(jīng)病變（Leber hereditary optic neuropathy,LHON）是一種發(fā)生于視神經(jīng)的退行性疾病。在中國漢族人群中,其主要與三種線粒體DNA（mtDNA）突變:m.3460G＞A,m.11778G＞A和m.14484T＞C相關。盡管有幾種方法可以對這些突變進行基因分型,如:SSCP-PCR、RFLP-PCR以及DNA測序等等,但由于費用昂貴、手續(xù)復雜、耗時長等因素,限制了其在臨床推廣使用。很少有針對LHON mtDNA三個突變位點的具備快速,低成本和易處理優(yōu)勢的定量方法的報道。因此,本研究詣在建立一種基于TaqMan小溝結合物（MGB）探針的熒光定量PCR（qPCR）方法,以對三個LHON mtDNA突變進行定性和定量分析。方法:1.針對中國漢族人群mtDNA的m.3460G＞A,m.11778G＞A和m.14484T＞C 3個常見的突變位點分別構建相應的突變陽性對照標準品和陰性對照標準品。按照TaqMan-MGB探針qPCR引物探針設計原則分別針對LHON基因3種高頻突變位點設計引物和探針。2.優(yōu)化引物和探針比例,優(yōu)化退火溫度,建立起可以... 

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分:mtDNA突變標準品的構建及引物探針的優(yōu)化設計
    1 材料與方法
    2 結果
    3 討論
第二部分:針對LHON三個突變位點定量檢測的TaqMan-MGB探針qPCR方法的建立
    1 材料與方法
    2 結果
    3 討論
第三部分:三重TaqMan-MGB探針qPCR方法的臨床樣本驗證
    1 材料與方法
    2 結果
    3 討論
全文總結
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的學術論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]A Meta-analysis of the association between different genotypes（G11778A, T14484C and G3460A ） of Leber hereditary optic neuropathy and visual prognosis[J]. Dong-Yu Guo,Xia-Wei Wang,Nan Hong,Yang-Shun Gu.  International Journal of Ophthalmology. 2016(10)
[2]線粒體DNA在分子進化研究中的應用[J]. 陳星,沈永義,張亞平.  動物學研究. 2012(06)



本文編號：3724292