研究目的:神經(jīng)病理性疼痛的一種共同的內(nèi)在機制是損傷或受到影響的神經(jīng)發(fā)生炎癥。這種炎癥反應(yīng)引起一連串的事件導(dǎo)致先天免疫細胞集中到損傷組織附近并被激活。包括細胞因子,神經(jīng)營養(yǎng)因子和趨化因子在內(nèi)的免疫活性物質(zhì)的釋放引起局部反應(yīng),并進一步導(dǎo)致更廣泛的免疫反應(yīng)。外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的致敏是神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生和維持的主要原因,而炎癥免疫機制是調(diào)節(jié)這些環(huán)節(jié)的關(guān)鍵。神經(jīng)病理性疼痛在中醫(yī)辨病辨證中歸于“痹證”范疇,中藥復(fù)方身痛逐瘀湯具有身痛逐瘀湯具有行氣活血逐瘀,祛風(fēng)除濕止痛之功效,作為治療痹證尤其是瘀血痹的代表方�，F(xiàn)代藥理研究證明,全方具有顯著的抗炎,鎮(zhèn)痛,改善微循環(huán)以及抗變態(tài)反應(yīng)作用�；诙鷾y序技術(shù)的高通量測序（RNA-Seq）技術(shù)是目前應(yīng)用最廣泛的轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù),能快速獲得檢測樣本的全部遺傳信息。RNA-Seq具有實驗成本低以及高通量特性等優(yōu)點,可用來研究基因的結(jié)構(gòu)和功能,鑒定基因表達量的變化,探究調(diào)控的可變剪接模式等。在生命科學(xué)領(lǐng)域,該技術(shù)已被用來探尋疾病的發(fā)生機制、臨床的診斷以及藥物藥理學(xué)研究等。因此本研究將基于RNA-Seq技術(shù)探究身痛逐瘀湯在治療神經(jīng)病理性疼痛中潛在的作用靶點,為該疾病治療... 

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
中英文縮略詞表
前言
1.材料
    1.1 實驗細胞株
    1.2 實驗試劑及耗材
    1.3 實驗儀器
    1.4 主要試劑配置及實驗準備
2.方法
    (一)文獻檢索
    (二)細胞實驗前準備和基本操作
    (三)熒光定量q-PCR、Western-blot以及MTT法檢測法
    2.1 克隆與質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.2 轉(zhuǎn)染
    2.3 基因過表達的評估
    2.4 RNA提取、測序
    2.5 RNA-seq數(shù)據(jù)處理和校準
    2.6 差異表達基因(DEG)分析
    2.7 可變剪接分析
    2.8 DEGs和AS事件的反轉(zhuǎn)錄qPCR驗證
    2.9 功能富集分析
3.實驗結(jié)果
    3.1 檢索結(jié)果
    3.2 過表達STAU1促進細胞增殖
        3.2.1 過表達載體轉(zhuǎn)染GFP熒光表達
        3.2.2 Q-PCR檢測結(jié)果
        3.2.3 Western blot結(jié)果
        3.2.4 細胞增殖結(jié)果
    3.3 RNA-seq分析STAU1過表達的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
        3.3.1 制備cDNA文庫
        3.3.2 FPKM量化STAU1的表達值
        3.3.3 樣本間聚類分析
        3.3.4 構(gòu)建MA plot圖
    3.4 STAU1調(diào)節(jié)富集在炎癥和免疫反應(yīng)相關(guān)基因的表達
        3.4.1 對差異表達基因(DEGs)作heapmap分析
        3.4.2 GO富集分析
        3.4.3 KEGG富集分析
        3.4.4 DEGs的層次聚類圖
        3.4.5 四個差異表達基因IFIT2、OASL、IFIT3、CCL2的reads分布圖
    3.5 STAU1能正調(diào)控HeLa細胞中IFIT2、OASL、IFIT3的表達,以及負調(diào)控CCL2基因表達
        3.5.1 RNA-seq中基因表達量檢測
        3.5.2 Q-PCR驗證結(jié)果
    3.6 STAU1調(diào)節(jié)富集于神經(jīng)生長因子受體信號通路中基因的可變剪接
        3.6.1 樣本外顯子檢出情況和剪接位點分析
        3.6.2 樣本中AS事件的檢出情況
        3.6.3 顯著差異AS事件數(shù)量和類型
        3.6.4 檢測同時發(fā)生RASG和DEG的基因
        3.6.5 可變剪接基因的GO和KEGG pathway富集性分析
    3.7 STAU1調(diào)控HeLa細胞中PLEKHG2、ARHGEF11、FGFR1、PDGFB、FGFR4、RALGDS的可變剪接
        3.7.1 可變剪接事件測序結(jié)果
        3.7.2 熒光定量Q-PCR檢測
4.討論
結(jié)語
參考文獻
附錄 基于RNA-seq技術(shù)在RNA結(jié)合蛋白中的研究進展
    參考文獻
附表
致謝



本文編號：3686712