目的:1.探討miR-31對結腸炎的促進作用是否通過靶向SATB2。2.使用miR-31過表達的轉基因小鼠,探討miR-31促進結腸炎的分子機制。方法:1.SATB2敲低實驗:將人結腸上皮細胞HCT 116分為control組、miR-31過表達組（轉染miR-31 mimic,使miR-31過表達）、miR-31敲低組（轉染miR-31 inhibiror,抑制miR-31的表達）、si-SATB2組（轉染SATB2 siRNA,抑制SATB2的表達）。使用脂質(zhì)體瞬時轉染后將細胞放入CO2孵箱中,孵育72h后收取細胞。qRT-PCR檢測siRNA的轉染效率和最佳轉染濃度;Western Blot檢測4組細胞SATB2、NF-κB、COX-2、TGF-β1蛋白的表達。2.SATB2過表達實驗:將人結腸上皮細胞HCT 116分為control組、pEXP-RB-Mam組（轉染空載體）、pEXP-RB-Mam-SATB2組（轉染SATB2過表達質(zhì)粒）,待細胞貼壁后使用lip2000進行轉染,轉染后將細胞放入CO₂孵箱中孵育,6h后進行換液,72h后收集細胞。Weste... 

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【學位級別】：碩士

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前言
第一部分 SATB2對miR-31 促進結腸炎的影響
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 實驗分組
        1.3 實驗方法
        1.4 統(tǒng)計學分析
    2 結果
        2.1 SATB2 siRNA的轉染效率以及最佳轉染濃度
        2.2 Western Blot檢測HCT116 細胞中SATB2 蛋白的表達
        2.3 Western Blot檢測HCT116 細胞中炎癥相關蛋白的表達
        2.4 Western Blot檢測SATB2 過表達質(zhì)粒的轉染效率
        2.5 SATB2 過表達對HCT116 細胞炎癥相關蛋白表達的影響
    3 討論
    4 結論
第二部分 miR-31 通過調(diào)節(jié)TLR4/NF-κB信號通路促進腸炎發(fā)生
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 實驗分組
        1.3 實驗方法
        1.4 統(tǒng)計學分析
    2 結果
        2.1 Western Blot檢測小鼠結腸組織SATB2 蛋白的表達
        2.2 IHC檢測小鼠結腸組織SATB2 蛋白的表達
        2.3 Western Blot檢測小鼠結腸組織TLR4、NF-ΚB蛋白的表達
        2.4 IHC檢測小鼠結腸組織TLR4、NF-κB蛋白的表達
        2.5 小鼠結腸組織中COX-2、TNF-α、iNOS蛋白的表達
    3 討論
    4 結論
第三部分 miR-31 對潰瘍性結腸炎小鼠結腸上皮細胞凋亡的影響
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 實驗分組
        1.3 實驗方法
        1.4 統(tǒng)計學分析
    2 結果
        2.1 小鼠結腸組織細胞的凋亡指數(shù)
        2.2 Western Blot檢測小鼠結腸組織中凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2 的表達
        2.3 IHC檢測小鼠結腸組織中凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2 的表達
    3 討論
    4 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
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本文編號：3674007