[背景]低剪切應力誘導的血管內皮細胞（vascular endothelial cells,VECs）炎癥在動脈粥樣硬化（atherosclerosis,As）的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用,但其調節(jié)機制尚不清楚。新近研究表明,細胞焦亡是一種炎性、程序性的細胞死亡形式,與As的發(fā)生和發(fā)展密切相關。我們前期的研究表明,Tet甲基胞嘧啶雙加氧酶2（Tet methylcytidine dioxygenase 2,TET2）是剪切應力敏感基因,低剪切應力下調TET2的表達,TET2 shRNA上調血管內皮細胞琥珀酸脫氫酶復合體B亞基（Succinic acid dehydrogenase complex B,SDHB）的表達。在本文中,我們將探討TET2/SDHB在低剪切應力誘導VECs焦亡中的作用及其機制。[目的]探討低剪切應力誘導VECs焦亡的調節(jié)機制。[方法]1、采用平行平板流動腔系統(tǒng),從細胞水平觀察低剪切應力和生理剪切應力下人臍靜脈內皮細胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）焦亡相關蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

低剪切力促進血管內皮細胞焦亡相關基因表達并下調TET2的表達A-B.低剪切力上調血管內皮細胞NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18以及IL-1β蛋白的

163.2TET2shRNA促HUVECs焦亡為了進一步觀察TTE2低表達與血管內皮細胞焦亡之間的關系，于是我們使用了綠色熒光蛋白（Greenfluorescentprotein，GFP）標記的TET2shRNA慢病毒轉染HUVECs株，轉染72h后采用熒光顯微鏡觀察其轉染效率并采用Westernblot檢測其TET2的蛋白表達水平，結果表明TET2shRNA明顯下調TET2表達（圖3.2A-C），提示已成功構建TET2低表達HUVECs。Westernblot檢測TET2shRNA組、空白對照組、陰性對照組組中焦亡相關蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18以及IL-1β的表達水平，結果提示與陰性對照相比，TET2shRNA組上調了NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18以及IL-1β的表達，表明TET2shRNA促進HUVECs焦亡(圖3.2D,E)。圖3.2TET2shRNA促HUVECs焦亡A,采用TET2shRNA慢病毒轉染HUVECs72h，熒光顯微鏡檢測TET2shRNA慢病毒轉染

18圖3.3過表達TET2抑制低剪切應力誘導的HUVECs焦亡A,過表達TET2的慢病毒轉染72h后采用熒光顯微鏡檢測TET2轉染效率；B-C,過表達TET2慢病毒轉染96h后，采用Westernblot檢測TET2蛋白的表達。***P<0.001vsControl組。D-E,過表達TET2慢病毒轉染96h后予以灌流6h處理,westernblot檢測血管內皮細胞焦亡相關蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18以及IL-1β的表達。**P<0.01，***P<0.001vs5dyne/cm2組，n=3。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3596507