發(fā)布時(shí)間：2017-05-07 08:11

  本文關(guān)鍵詞：氧化應(yīng)激介導(dǎo)HMGA2通路在鎘誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞增殖中的機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：鎘(cadmium)是一種常見的存在于環(huán)境中的重金屬。鎘主要應(yīng)用于鎘電池,陶瓷釉彩,照相機(jī)和復(fù)寫紙的制造及合成纖維印染助劑等。隨著鎘在生產(chǎn)生活中的應(yīng)用,人們也越來越關(guān)注鎘暴露對(duì)人類健康的影響。大量流行病學(xué)研究表明,長期暴露在鎘環(huán)境的人群肺癌發(fā)病率升高。1993年國際癌癥研究中心(IARC)將鎘列為Ⅰ類致癌物,但是目前鎘致癌的分子機(jī)制尚不清晰。目的:本研究擬采用人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5為體外模型,通過觀察細(xì)胞增殖、活性氧變化、高遷移率蛋白A2(HMGA2)表達(dá)、細(xì)胞周期等指標(biāo),探討鎘致肺癌的可能分子機(jī)制,為鎘致癌的預(yù)防和治療提供可能的理論依據(jù)。方法:本研究以人胚肺成纖維細(xì)胞(MRC-5)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT)檢測(cè)不同濃度氯化鎘對(duì)MRC-5細(xì)胞存活率的影響,采用熒光分子探針2’,7’—二氫二氯熒光素(DCFH)的熒光比色方法,檢測(cè)氯化鎘對(duì)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)生成的影響。蛋白印跡法(Western blot)檢測(cè)低濃度氯化鎘對(duì)HMGA2和細(xì)胞周期相關(guān)蛋白Cyclin D1表達(dá)的影響,q RT-PCR法檢測(cè)HMGA2基因的表達(dá),流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的變化,Si Mi Transfection Reagents試劑干擾目的基因HMGA2,觀察HMGA2在氯化鎘致細(xì)胞周期變化中的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:低濃度氯化鎘(2μM)作用MRC-5細(xì)胞48h后,MRC-5細(xì)胞增殖率明顯上升,說明低濃度的氯化鎘對(duì)MRC-5細(xì)胞有促進(jìn)增殖的作用(P0.01)。氯化鎘(2μM)處理組細(xì)胞內(nèi)活性氧類物質(zhì)生成明顯比正常對(duì)照組增多(P0.01)表明低濃度氯化鎘能引起MRC-5細(xì)胞的氧化應(yīng)激。隨著(2μM)氯化鎘染毒時(shí)間增加,細(xì)胞內(nèi)HMGA2蛋白的表達(dá)量逐漸增加(P0.05),HMGA2基因表達(dá)的水平也顯著增加(P0.05)。用抗氧化劑NAC預(yù)處理1小時(shí)后再用氯化鎘(2μM)染毒,與單獨(dú)氯化鎘組(2μM)相比,HMGA2蛋白表達(dá)水平顯著降低(P0.01),MRC-5細(xì)胞的增殖水平也顯著下降,表明ROS與鎘誘導(dǎo)的HMGA2表達(dá)升高和促增殖作用密切相關(guān)。氯化鎘(2μM)染毒組周期蛋白Cyclin D1表達(dá)含量明顯比空白對(duì)照組增加(P0.05)。而HMGA2 si RNA+Cd Cl2處理組的Cyclin D1蛋白表達(dá),與control si RNA+Cd Cl2處理組(2μM)相比,顯著降低(P0.01)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果顯示,2μM氯化鎘染毒組S期細(xì)胞數(shù)明顯高于空白對(duì)照組,G0/G1期明顯縮短。采用si RNA沉默HMGA2后,Cd Cl2不再引起Cyclin D1蛋白表達(dá)增加,S期細(xì)胞數(shù)增加以及G0/G1期的縮短,表明HMGA2通過誘導(dǎo)Cyclin D1蛋白表達(dá)升高而促使S期細(xì)胞增加是鎘誘導(dǎo)細(xì)胞增殖的主要原因。結(jié)論:低劑量氯化鎘具有促進(jìn)MRC-5細(xì)胞增殖的作用,其促增殖作用與氧化應(yīng)激有關(guān)。低劑量氯化鎘引起的氧化應(yīng)激促進(jìn)了HMGA2基因和蛋白表達(dá)水平升高,而HMGA2蛋白表達(dá)的升高又促進(jìn)了細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1的表達(dá),從而改變了細(xì)胞周期分布,DNA合成期S期細(xì)胞增多,靜止期G0/G1期縮短,最終導(dǎo)致了細(xì)胞增殖加速,因此,本研究初步表明了鎘通過氧化應(yīng)激引起的HMGA2表達(dá)升高進(jìn)一步調(diào)控Cyclin D1和細(xì)胞周期分布是鎘誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞增殖的主要分子機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：鎘 HMGA2 ROS 細(xì)胞周期 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• （一）前言12-13
• （二）材料與方法13-20
• 1．實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象13
• 1.2 藥品和主要試劑13-14
• 1.3 主要儀器14-15
• 2 實(shí)驗(yàn)方法15-20
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及處理15
• 2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染15
• 2.3 MTT 實(shí)驗(yàn)15-16
• 2.4 細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）測(cè)定16
• 2.5 細(xì)胞周期測(cè)定16
• 2.6 蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）16-18
• 2.7 熒光實(shí)時(shí)定量 PCR 法檢測(cè)基因表達(dá)水平18-19
• 2.8 統(tǒng)計(jì)方法19-20
• （三）結(jié)果20-26
• 1 氯化鎘對(duì) MRC-5 細(xì)胞增殖的影響20-21
• 2 氯化鎘對(duì) MRC-5 細(xì)胞內(nèi) ROS 水平的影響21
• 3 氯化鎘對(duì) MRC-5 細(xì)胞內(nèi) HMGA2 蛋白表達(dá)的影響21-23
• 4 氯化鎘對(duì) MRC-5 細(xì)胞內(nèi) HMGA2 基因表達(dá)的影響23-24
• 5 氯化鎘對(duì) MRC-5 細(xì)胞細(xì)胞周期相關(guān)蛋白 Cyclin D1 的影響24
• 6 氯化鎘對(duì) MRC-5 細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞周期的影響24-26
• （四）討論26-31
• （五）結(jié)論31-32
• （六）參考文獻(xiàn)32-39
• 綜述39-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 致謝48-49

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 歐陽彩群;葉卓明;曾艷飛;;亞硒酸鈉拮抗氯化鎘染毒大鼠肝、腎細(xì)胞損傷的研究[J];浙江預(yù)防醫(yī)學(xué);2012年07期

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3 王曉麗,李永安,馮彪,凌翎,李志超,郭麗,范洪學(xué);氯化鎘致癌機(jī)理的研究[J];中國公共衛(wèi)生學(xué)報(bào);1999年02期

4 李永安,王曉麗,石愛平,馮彪,凌翎,李志超,范洪學(xué);氯化鎘對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化作用[J];衛(wèi)生研究;2000年01期

5 魏雪濤,宋曉明,薛彬;氯化鎘對(duì)小鼠免疫細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J];環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué);2003年06期

6 李國慶;李

本文編號(hào)：349494