研究目的:研究證明在骨骼肌損傷模型的各個階段,都有一些產(chǎn)生自由基的潛在位點,即氧自由基產(chǎn)生導(dǎo)致的氧化應(yīng)激在骨骼肌損傷和修復(fù)的整個過程中,都是一個重要的因素。雌激素由于其抗氧化結(jié)構(gòu)特性,是否能在骨骼肌損傷和修復(fù)過程中發(fā)揮其抗氧化作用,從而保護(hù)和預(yù)防肌肉免受損傷和炎癥,目前國內(nèi)外研究較少,因此本研究在建立過氧化氫誘導(dǎo)的小鼠C₂C₁₂成肌細(xì)胞氧化損傷的基礎(chǔ)上,探討雌激素補充對骨骼肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用,并探討相關(guān)的機制,為雌激素治療和預(yù)防骨骼肌損傷提供細(xì)胞水平的實驗依據(jù)。研究方法:本實驗以小鼠C₂C₁₂成肌細(xì)胞為研究對象,建立過氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激模型,細(xì)胞傳代培養(yǎng)達(dá)到80%融合后,更換無血清培養(yǎng)基進(jìn)行分組并設(shè)置復(fù)孔,實驗分為對照組（C組,空白對照組）、雌激素組（E組,用1μmol/L的17β-雌二醇預(yù)處理1小時）、過氧化氫組（H組,加入1mmol/L過氧化氫）、雌激素過氧化氫組（EH組,用1μmol/L的17β-雌二醇預(yù)處理1小時后加入1mmol/L過氧化氫）。干預(yù)結(jié)束后分別檢測培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶... 

【文章來源】：上海體育學(xué)院上海市

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Keap1/Nrf2/ARE信號通路鑒于目前對雌激素在骨骼肌損傷與修復(fù)方面的研究主要集中在動物和人體實驗，相關(guān)細(xì)胞水平的離體實驗研究較少，并且分子機制方面主要集中在雌激素

∈?EH)，并設(shè)置空白對照組(C)。A:細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活性。**P<0.001,與C組相比；##P<0.001,與H組相比。B:細(xì)胞毒性。**P<0.001,與C組相比；##P<0.001,與H組相比。圖2雌激素對H2O2誘導(dǎo)小鼠C2C12成肌細(xì)胞氧化損傷細(xì)胞毒性的影響4.2雌激素對H2O2誘導(dǎo)小鼠C2C12成肌細(xì)胞氧化損傷后細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)生成的影響因為H2O2的毒性是通過活性氧(ROS)生成而介導(dǎo)的，因此本實驗用DCF-DA法研究了雌激素是否阻斷了H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激，增強了C2C12細(xì)胞的抗氧化防御系統(tǒng)。檢測各組細(xì)胞的DCF產(chǎn)物相對熒光水平，結(jié)果顯示(圖3)，與對照組(C組)相比，雌激素組(E組)沒有顯著性差異(100%，116.67±17.51%，P=0.206)，過氧化氫組(H組，)顯著增加(100%，606.67±21.60%，P<0.001)；與過氧化氫組相比，雌激素過氧化氫組(EH組)顯著降低(606.67±21.60%，251.67±34.30%，P<0.001)。結(jié)果提示H2O2誘導(dǎo)了小鼠C2C12成肌細(xì)胞ROS生成的增加，雌激素顯著降低了H2O2誘導(dǎo)的ROS生成，且在沒有H2O2干預(yù)的情況下，雌激素對ROS的生成沒有顯著作用。小鼠C2C12成肌細(xì)胞分別用1μmol/L17β-雌二醇預(yù)處理1小時(E)、1mmol/LH2O2作用24小時(H)、1μmol/L17β-雌二醇預(yù)處理1小時后加入1mmol/LH2O2作用24小時(EH)，并設(shè)置空白對照組(C)。**P<0.001,與C組相比；##P<0.001,與H組相比。圖3雌激素對細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)生成的影響4.3雌激素對H2O2誘導(dǎo)小鼠C2C12成肌細(xì)胞氧化損傷后細(xì)胞活力的影響為了評價雌激素是否對H2O2誘導(dǎo)小鼠C2C12成肌細(xì)胞氧化損傷后細(xì)胞活力有影響，本實驗通過MTT法檢測各組細(xì)胞吸光度值，并計算細(xì)胞相對活力(cellviability%)。吸光度結(jié)果顯示(圖4，A)，與對照組(C組)相比，雌激素組(E組)無顯著差別(0.36±0.04，0.37±0.03，P=0.5

雌激素對小鼠C2C12成肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究24小鼠C2C12成肌細(xì)胞分別用1μmol/L17β-雌二醇預(yù)處理1小時(E)、1mmol/LH2O2作用24小時(H)、1μmol/L17β-雌二醇預(yù)處理1小時后加入1mmol/LH2O2作用24小時(EH)，并設(shè)置空白對照組(C)。A:細(xì)胞內(nèi)Nrf2的表達(dá)。*P<0.01,與C組相比；#P<0.01,與H組相比。B:細(xì)胞內(nèi)p-Nrf2蛋白的表達(dá)。*P<0.01,與C組相比；#P<0.01,與H組相比。C：細(xì)胞內(nèi)HO-1的表達(dá)。*P<0.01,與C組相比；#P<0.01,與H組相比。圖6雌激素對相關(guān)蛋白表達(dá)的影響5討論研究證明，氧化應(yīng)激是伴隨著衰老、炎癥、神經(jīng)退行性疾并心血管疾病和肌肉骨骼損傷疾病等生理、病理狀態(tài)發(fā)生的[2]。氧化應(yīng)激超出生理適應(yīng)能力時，自由基會造成細(xì)胞內(nèi)糖脂代謝和蛋白質(zhì)代謝的紊亂，攻擊細(xì)胞膜以及細(xì)胞核造成核酸代謝紊亂，同時還會引起直接或間接ROS介導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化和蛋白質(zhì)修飾，從而使細(xì)胞變性誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡或壞死，進(jìn)而導(dǎo)致骨骼肌損傷的發(fā)生以及修復(fù)的延遲等一系列負(fù)面影響。目前細(xì)胞水平的氧化應(yīng)激實驗普遍采用過氧化氫誘導(dǎo)細(xì)胞氧化損傷模型，YinghuiRen等[101]為驗證具有有效的抗糖尿并抗動脈粥樣硬化和抗炎特性的脂聯(lián)素（APN）是否在骨骼肌中也具有抗氧化活性及其調(diào)節(jié)機(C)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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