目的:探討糖基化脂肪來源干細(xì)胞對(duì)SD大鼠單穿支皮瓣神經(jīng)再生的作用及可能機(jī)制,為促進(jìn)臨床皮瓣感覺恢復(fù)提供前期研究基礎(chǔ)。方法:1.經(jīng)患者知情同意并通過遵義醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后,從遵義醫(yī)科大學(xué)燒傷整形外科正常人抽脂手術(shù)中獲取皮下脂肪組織,利用Ⅰ型膠原酶消化機(jī)械離心分離,從正常人皮下脂肪中提取脂肪來源干細(xì)胞（ASCs）,用含10%胎牛血清（FBS）+1%雙抗的低糖DMEM（1g/L）培養(yǎng)基,在37℃、5%CO2恒溫孵箱中進(jìn)行培養(yǎng),利用0.25%胰酶消化傳代。2.取P3 nASCs進(jìn)行鑒定,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物CD105、CD90、CD73、CD45、CD44、CD34、CD11b、CD19及HLA-DR的表達(dá)情況。行成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn),分別用油紅“O”、茜素紅、阿利辛藍(lán)染色鑒定成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)分化效果。3.取P3 nASCs,用含0.2%晚期糖基化終產(chǎn)物（AGES）、15%FBS+1%雙抗的高糖DMEM（4.5g/L）的糖基化誘導(dǎo)培養(yǎng)基,在37℃、5%CO2恒溫孵箱中進(jìn)行培養(yǎng),2-3天換液一次,連續(xù)誘導(dǎo)21天獲得糖基化脂肪來源干細(xì)胞（gASCs）。4.分別收集nA... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠腹部設(shè)計(jì)3cmx2cm島狀；B：皮瓣切取后剔除單穿支血管周圍多余神經(jīng)結(jié)締

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文鄭詠艦202結(jié)果2.1nASCs和gASCs的培養(yǎng)成功從正常人脂肪組織中分離nASCs，原代細(xì)胞生長速度較慢，在提取12h后可見少量細(xì)胞貼壁生長，呈多邊形或長梭形，48h更換完全培養(yǎng)基后細(xì)胞生長速度加快，8-10d融合可達(dá)80%，傳代后細(xì)胞生長速度明顯增快，5-7天后可再次傳代，傳至P3代后，取nASCs開始糖基化誘導(dǎo)培養(yǎng)，隨著誘導(dǎo)時(shí)間延長，gASCs較nASCs增殖速度減慢，需7-9天才能進(jìn)一步傳代，而nASCs仍保持5-7天可再次傳代，形態(tài)上gASCs形態(tài)與nASCs差異不明顯，排列兩者均呈放射樣漩渦狀生長。（如圖2）nASCsgASCs圖2P3代nASCs與gASCs細(xì)胞形態(tài)均呈長梭形，放射狀漩渦狀生長（x40）2.2nASCs的表型鑒定取培養(yǎng)傳代至P3代的nASCs，利用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物，結(jié)果表明：CD44(98.5%)、CD73(99.96%)、CD90(97.09%)、CD105(98.00%)表達(dá)呈陽性，CD45/CD34/CD11b/CD19/HLA-DR(1.56%)表達(dá)呈陰性。（如圖3）

CD44(98.5%)、CD73(99.96%)、CD90(97.09%)、CD105(98.00%)，呈陽性表達(dá)，


本文編號(hào)：3411037