目的:探討煙草煙霧誘發(fā)小鼠模擬干眼模型的病理改變。方法:選取18雄性無特定病原體c57BL小鼠（18-22g）,隨機分為對照組、4周組和12周組,每組6只小鼠,其中6只進行4周的煙草煙霧干預,6只進行12周煙草煙霧干預。按每天20支香煙的設計進行煙草煙霧中毒,小鼠置于中毒柜,每天傳輸3次煙氣（30分鐘/次）。造模成功后,對每組進行淚膜破裂時間（BUT）實驗、活體染色、炎癥指數(shù)評分,熒光素染色和共聚焦顯微鏡觀察。分別在第4周和第12周安樂死小鼠,取眼睛組織進行Western Blot檢測、免疫熒光染色、TUNEL染色、過碘酸-希夫染色（PAS）和蘇木精-伊紅染色（HE）。結果:干預前三組間BUTs,FL評分,共聚焦顯微鏡觀察無差異。干預后與其他兩組相比12周組的BUTs相比其他兩組顯著下降,FL評分顯著升高,角膜上皮細胞密度降低,基底上皮細胞密度增加,角膜上皮、結膜厚度增加,差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。對照組和4周組角膜熒光素鈉染色、共聚焦顯微鏡檢查呈陰性,HE染色未發(fā)生顯著改變。12周組呈陽性。12周組共聚焦顯微鏡觀察顯示角膜上皮細胞出現(xiàn)壞死和脫落,強烈反射,細胞間隙擴大,... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

應用激光共聚焦顯微鏡檢測小鼠角膜神經(jīng)纖維分布

第3章實驗結果16第3章實驗結果3.1淚膜穩(wěn)定性和上皮損傷干預前三組間BUTs，F(xiàn)L評分比較差異無統(tǒng)計學意義（圖1B，1C）。與對照組和4周干預組相比，12周組的BUTs和熒光素鈉染色評分顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義（*P<0.05，圖1B，1C）。4周組與對照組相比，的BUTs和熒光素鈉染色評分差異不存在統(tǒng)計學意義（P>0.05，圖1B，1C）。在煙草煙霧干預后，4周組和對照組的角膜熒光素鈉染色呈陰性（圖1A），12周組的角膜熒光素鈉染色表現(xiàn)為陽性（圖1A）。在12周組中出現(xiàn)淚膜/上皮損傷，可能是由于煙草煙霧的毒性（*P<0.05，圖1A-C）圖1.對照組、4周組和12周組實驗前后眼表改變情況。A三組經(jīng)熒光素鈉染色后眼表情況：對照組和4周組未出現(xiàn)明顯著染，僅出現(xiàn)極少點狀染色，12周組小鼠角膜的上、下、鼻、顳四個象限均著染，且出現(xiàn)斑塊狀染色。B三組在實驗前和實驗后BUTs時間改變情況：對照組和4周組BUTs時間在實驗前后未發(fā)生顯著變化，12周組BUTs時間在進行煙草煙霧干預實驗后出現(xiàn)明顯的下降。C三組在實驗前和實驗后FL評分改變情況：對照組和4周組FL評分在實驗前后未發(fā)生顯著變化，12周組FL評分在實驗后出現(xiàn)明顯的上升。*表示實驗后與實驗前相比差異具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。

第3章實驗結果18圖2.對照組、4周組和12周組小鼠角膜上皮共聚焦顯微鏡下觀察的改變情況代表性圖像。A三組共聚焦顯微鏡下表層上皮細胞觀察情況：對照組和4周組表層上皮細胞未出現(xiàn)明顯異常。在12周組中，觀察圖像顯示病灶出現(xiàn)壞死和角膜上皮細胞脫落（紅色箭頭），并且其細胞出現(xiàn)強烈反射（綠色箭頭）。B三組共聚焦顯微鏡下基底上皮細胞觀察情況：對照組和4周組基底上皮細胞未出現(xiàn)明顯異常。在12周組中，觀察圖像顯示出現(xiàn)具有超反射核的局灶性基底上皮細胞（綠色箭頭）。C三組表層上皮細胞數(shù)目比較：對照組和4周組的表層上皮細胞密度差異不明顯，而在12周組中表層上皮細胞密度則相對對照組和4周組均明顯更低。D三組基底上皮細胞數(shù)目比較：對照組和4周組的基底上皮細胞密度差異不明顯，而12周組的基底上皮細胞密度則相對對照組和4周組均明顯更低。平均細胞密度是通過計算各組中的每層4張圖片來確定的。*表示12周組與對照組、4周組細胞數(shù)目相比差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。3.3角膜上皮HE染色情況我們通過光學顯微鏡觀察每組的角膜上皮。對照組的角膜上皮由4至6層整齊排列的細胞組成。且其表層上皮相對完整，基底細胞排列成單層，細胞核呈橢圓形（圖3A）。在煙草煙霧干預4周后，4周組的HE染色情況未發(fā)生顯著變化（圖3A）。在煙草煙霧干預12周后，角膜上皮HE染色顯示角膜上皮厚度增加，各層細胞排列紊亂，淺表上皮細胞局部缺損和脫落，角膜表面不光滑（圖3A）。對照組與4周組之間未表現(xiàn)出顯著差異（P>0.05，圖3D），但12周組與其他兩組之間均存在顯著差異（*P<0.05，圖3D）

【參考文獻】：
期刊論文
[1]搭建交流平臺 推動務實合作 實現(xiàn)共同發(fā)展 世界律師大會在廣州召開[J].   醫(yī)學與法學. 2019(06)
[2]民用飛機維修性的適航符合性驗證的研究[J]. 陶歡.  科技視界. 2017(09)



本文編號：3336585