目的:觀察改變NDUFA4表達對人結(jié)直腸癌（colorectal carcimona,CRC）細胞生長的影響;探討NDUFA4對人CRC細胞生長影響可能的分子機制;檢測NDUFA4在人CRC臨床組織中的表達并分析其臨床意義。方法:1.利用Real time PCR和Western Blot檢測不同人結(jié)直腸癌細胞株中NDUFA4的表達情況;免疫熒光法驗證人結(jié)直腸癌細胞株SW620細胞和SW480細胞中NDUFA4的表達;設(shè)置p-NDUFA4組、p-Cont組和sh-NDUFA4組、sh-NC組,利用Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染試劑,將前期構(gòu)建的NDUFA4過表達質(zhì)粒（p-NDUFA4）、對照質(zhì)粒（p-Cont）和NDUFA4干擾質(zhì)粒（p-shNDUFA4）、對照質(zhì)粒（p-shCont）分別體外瞬時轉(zhuǎn)染人CRC直腸癌SW620細胞和SW480細胞;Real time PCR和Western Blot檢測轉(zhuǎn)染后各組細胞中NDUFA4的表達情況;CCK-8法和克隆形成實驗檢測各組細胞增殖活性和克隆形成能力;流式細胞術(shù)檢測細胞周期的變化;Western Blot檢測細胞周期相關(guān)蛋白及... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學貴州省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

人結(jié)直腸癌細胞株中NDUFA4的表達Fig.1-1TheexpressionofNDUFA4indifferenthumanCRCcellswasdetectedbyRealtime

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文劉士明30細胞表達更高水平的NDUFA4（圖1-2，P<0.05），與我們前面實驗結(jié)果一致�；贜DUFA4在人結(jié)直腸癌細胞株中的表達差異，在后續(xù)研究中，我們分別在SW620細胞中過表達NDUFA4和在SW480細胞中下調(diào)NDUFA4表達，觀察改變NDUFA4表達是否影響人CRC細胞的生長。圖1-2NDUFA4在人結(jié)直腸癌細胞中的表達Fig.1-2TheexpressionofNDUFA4inhumanCRCcells.ImmunofluorescencestainingwasusedtodetecttheexpressionofNDUFA4proteininhumanCRCcelllineSW620andSW480cells.Magnificance:60×.Therelativequantitivewascalculated.*P<0.05.3.1.3NDUFA4在人CRC直腸癌SW620細胞和SW480細胞中的表達為了觀察改變NDUFA4表達對SW620和SW480細胞生長的影響，我們首先通過RealtimePCR和WesternBlot技術(shù)分別檢測各組細胞中NDUFA4的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在SW620細胞中，與p-Cont對照組相比，p-NDUFA4過表達組中NDUFA4的表達水平明顯上調(diào)（圖1-3A-C，P<0.05），而在SW480細胞中，sh-NDUFA4組中NDUFA4的表達水平明顯低于sh-NC組，且差異具有統(tǒng)計學意義（圖1-3D-F，P<0.05）。

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文劉士明31圖1-3NDUFA4在人結(jié)直腸癌SW620和SW480細胞中的表達情況Fig.1-3TheexpressionofNDUFA4inhumanCRCSW620andSW480cells.HumanCRCSW620andSW480cellswereinstantaneouslytransfectedwithp-NDUFA4,p-Cont,sh-NDUFA4,orsh-NC,respectively.ThemRNAandproteinexpressionofNDUFA4weredeterminedbyRealtimePCR(A)(D)andWesternBlot(B)(E)andcalculated(C)(F).*P<0.05,**P<0.01.3.1.4NDUFA4對SW620和SW480細胞增殖和克隆形成能力的影響為了觀察改變NDUFA4表達對結(jié)直腸癌細胞SW620和SW480細胞生長的影響，我們選用CCK-8法檢測細胞的增殖活性，克隆形成實驗檢測了細胞的克隆形成能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在SW620細胞中，p-NDUFA4過表達組細胞的增殖能力和克隆形成能力較p-Cont對照組明顯增加（圖1-4A-C，P<0.05）；而在SW480細胞中，與sh-NC對照組相比，sh-NDUFA4下調(diào)組細胞的增殖能力和克隆形成能力明顯降低（圖1-4D-F，P<0.05），上述結(jié)果可說明NDUFA4基因的過表達可以有效促進SW620細胞的體外生長，而NDUFA4基因的下調(diào)能夠有效抑制SW480細胞體外生長。

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3315715