目的:通過觀察骨質(zhì)疏松癥模型大鼠的骨密度、骨生物力學(xué)指標(biāo)、骨代謝指標(biāo)、氧化應(yīng)激指標(biāo)的表達(dá),基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探討培本固疏方抗骨質(zhì)疏松的作用機(jī)制。方法:將42只SD雌性大鼠按體重隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、培本固疏方低、中、高劑量組和西藥組,每組7只。采用去雙側(cè)卵巢法建立骨質(zhì)疏松模型,假手術(shù)組僅切除卵巢旁脂肪組織約1。造模4周后施行干預(yù),大鼠等效劑量按成人每日服用劑量的6.3倍進(jìn)行換算。培本固疏方低劑量組:含培本固疏方生藥5.30g/Kg/d灌胃,培本固疏方中劑量組:含培本固疏方生藥10.61g/Kg/d灌胃,培本固疏方高劑量組:含培本固疏方生藥21.21g/Kg/d灌胃,西藥組:阿侖膦酸鈉水溶液1L/Kg/d灌胃。假手術(shù)組和模型對(duì)照組:給予等容量0.9%生理鹽水0.5mL/100g灌胃。各組藥劑均隔水溫?zé)岷蠊辔?灌胃持續(xù)8周后,計(jì)算子宮指數(shù),測(cè)定股骨骨密度及股骨生物力學(xué)彈性載荷、極限載荷、彈性模量等指標(biāo);采用ELISA法測(cè)定血清骨代謝指標(biāo)TRACP5b、sRANKL、OPG及氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA、AGEs的含量;采用Western Blot法檢測(cè)NF-κB、NFAT... 

【文章來源】：南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１：?ＡＧＥｓ／ＲＡＧＥ激活ＮＦ－ｋＢ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路??

?南京中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文???－產(chǎn)秘』＇??：書ｖ??？?．？?ｓ＾＝４，＂??圖２－１陰道涂片染色結(jié)果（ｘ３０）??１．２．２分組及干預(yù)??大鼠稱重后按體重由輕到重進(jìn)行編號(hào)，將體重相鄰６只分為１個(gè)區(qū)組，各區(qū)組內(nèi)參照??隨機(jī)數(shù)字表進(jìn)行隨機(jī)分組，分成假手術(shù)組（Ｃ組）、模型對(duì)照組（Ｄ組）、培本固疏方低??劑量組（Ｅ組）、培本固疏方中劑量組（Ｆ組）、培本固疏方高劑量組（Ｇ組）和西藥組??（Ｈ組），每組７只。各組大鼠自由飲食、自然光照，每周稱重１次。各組均于造模４周??后施行干預(yù)。??大鼠用藥等效劑量按成人每日服用劑量的６．?３倍進(jìn)行換算。培本固疏方低劑量組：含培??本固疏方生藥５．３０ｇ／Ｋｇ／ｄ灌胃，培本固疏方中劑量組：含培本固疏方生藥１０．６１ｇ／Ｋｇ／ｄ灌胃，??培本固疏方高劑量組：含培本固疏方生藥２１．２１ｇ／Ｋｇ／ｄ灌胃，西藥組：阿侖膦酸鈉水溶液??ｌｍＬ／Ｋｇ／ｄ灌胃。假手術(shù)組和模型對(duì)照組：給予等容量０．９％生理鹽水０．５ｍＬ／１００?ｇ灌胃。各??組藥劑均隔水溫?zé)岷蠊辔�，持續(xù)灌胃８周：７１］。??１．２?Ｊ標(biāo)本采集及測(cè)定方法??大鼠末次干預(yù)后，禁食２４ｈ，次日取材。取材前將大鼠稱重，麻醉方法同造模，腹主??動(dòng)脈抽血，處死。??１．２．３．１骨密度檢測(cè)??仔細(xì)快速分離肌肉等軟組織，取出完整左側(cè)股骨，浸泡于含有生理鹽水的標(biāo)本袋中，??４°Ｃ保存。將新鮮股骨標(biāo)本統(tǒng)一方位放于有機(jī)玻璃盒支架上固定，股骨全長的１／２處作為股??骨中段的測(cè)量點(diǎn)，股骨全長的中上１／４處作為股骨近端的測(cè)量點(diǎn)，用ＭＥＤＩＸ－９０雙能Ｘ線??骨密度儀掃描，得出骨密度值（ＢＭＤ），連續(xù)測(cè)量２次，計(jì)算變異系數(shù)的均方根表示股骨

?第二部分實(shí)驗(yàn)研究???０?１４０?／??／？Ｔ�。祝�??０１２０?／??ｗｉｗｅｃ；?／??０?１００?／??０．０８０?／??Ｚ?／??一?０．０６０?／??｜?／??０．０４０?／??０．０２０?／??０．０００?一’ｆ??????－０?２００?０?００〇／〇?２００?０?４０Ｃ?０?６００?０?８００?１?０００?１?２００?１?４００??——ｉ—?ｉ???ｎ?－?ｍ?—??－０．０２０?／??位移（ｍｍ）??圖２－２載荷－位移曲線圖??１．２．３．３血清代謝指標(biāo)??血液標(biāo)本采集后于４°Ｃ冰箱靜置４－６小時(shí)，以３０００轉(zhuǎn)／分鐘速度離心１０分鐘，取其上??清液。用酶聯(lián)免疫法參照說明書逐步進(jìn)行，檢測(cè)血清骨代謝指標(biāo)ｓＲＡＮＫＬ、ＯＰＧ、ＴＲＡＣＰ５ｂ??的含量以及氧化應(yīng)激指標(biāo)ＡＧＥｓ、ＭＤＡ的含量。??１．２．３．４子宮指數(shù)??仔細(xì)剔除子宮周圍脂肪組織后稱重，計(jì)算子宮指數(shù)。子宮指數(shù)＝子宮濕重／大鼠體重Ｘ??１００％。??１．２．３．５骨組織ＮＦ－ｋＢ蛋白及ＮＦＡＴｃ－１蛋白的表達(dá)（ＷＢ）??（１）冰箱中取出左側(cè)股骨標(biāo)本，剪下股骨近端１／５左右，剔除表面組織及骨髓等，在??預(yù)冷的ＰＢＳ中漂洗數(shù)次。稱重后剪碎放進(jìn)研缽中磨成粉末，放入組織勻漿器中按每２０ｍｇ??加入２００ｕｌ±２０ｕｌ裂解液，勾衆(zhòng)后在冰上震蕩裂解３０ｍｉｎ，充分裂解至溶液清澈無粘稠。４°Ｃ??卜１２０００轉(zhuǎn)／ｍｉｎ離心ｌＯｍｉｎ，取上清。??（２）用ＢＣＡ法測(cè)定蛋白濃度，而后用ＰＢＳ緩沖液調(diào)整濃度，沸水煮ｌＯｍｉｎ后放于冰??上冷卻，１２０００轉(zhuǎn)／ｍｉｎ離心２ｍｉｎ后取上清置于－２０°Ｃ冰箱保存。??

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