人血白蛋白（Human Serum Albumin,HSA）是一種在人類的血漿中含量最為豐富的一種血漿可溶性蛋白質(zhì),在腎臟和肝細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)化合成,本質(zhì)上是一種簡(jiǎn)單的血漿單體可溶性蛋白質(zhì),沒有任何輔基和以共價(jià)碳?xì)滏I形式結(jié)合的、脂質(zhì)或其他碳水化合物。臨床上人血白蛋白的生物學(xué)結(jié)構(gòu)性質(zhì)和種類較多,包括與有機(jī)陰離子和無機(jī)陽離子的結(jié)合、與其他藥物的離子耦合、藥物的靶向、抗氧化活性和酶活性等。我國(guó)是世界上消耗人血白蛋白的第一大國(guó),國(guó)內(nèi)產(chǎn)品供不應(yīng)求。雖然我國(guó)血液制品行業(yè)發(fā)展迅速,采漿量年年穩(wěn)中有升。但是,進(jìn)口人血白蛋白制品也在沖擊著國(guó)內(nèi)市場(chǎng),進(jìn)口制品銷售占比也在逐年增長(zhǎng),2018年已超過60%。目前,人血白蛋白的收率在2400-3000瓶/噸血漿,提取率僅占總白蛋白的60-70%。在提取過程中,因?yàn)槎喾N原因造成了白蛋白的流失,其中最主要流失的地方是:組分Ⅳ（Fraction IV）沉淀。因此,從組分Ⅳ沉淀中制備人血白蛋白具有非常重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。本學(xué)位論文以Cohn組分Ⅳ為原料,采用低溫乙醇法,先在實(shí)驗(yàn)室制備白蛋白,其中包括:考察了組分Ⅳ溶解液白蛋白溶出、組分Ⅳ-1分離條件、組分Ⅳ-2分離條件... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

人血白蛋白分子結(jié)構(gòu)[3]

第二章從組分IV沉淀中分離提純?nèi)搜椎鞍椎墓に囇芯?4圖2.2組分IV溶解液電泳掃描Figure2.2ElectrophoresisscanningofFractionIVlysate鑒于組分IV沉淀中含有一定的凝血酶原和金屬離子，為了不引起凝血效應(yīng)，我們選擇了含有枸櫞酸鈉、氯化鈉的乙醇溶液作為組分IV沉淀的溶解液。通過對(duì)組分IV沉淀在不同溫度、不同溶解倍數(shù)、不同乙醇濃度條件下，對(duì)組分IV沉淀中蛋白質(zhì)的溶出做了試驗(yàn)。本試驗(yàn)采用（L934）[42]正交試驗(yàn)考察3因數(shù)3個(gè)水平，按表2.2和表2.3配組進(jìn)行正交試驗(yàn)，對(duì)組分IV的溶解液白蛋白溶出率的影響。為減少測(cè)量蛋白質(zhì)含量過程中對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，以上條件溶解后均采用0.22μm濾膜將樣品過濾，準(zhǔn)確計(jì)量上清液體積，再對(duì)上清進(jìn)行蛋白質(zhì)含量和純度的檢測(cè)。根據(jù)純度結(jié)果，計(jì)算出上清液中白蛋白，白蛋白的值作為試驗(yàn)結(jié)果并進(jìn)行方差分析。1.3.2組分IV-1分離的最佳條件選擇按照選取出組分IV溶解最佳條件，另取同批混合的組分IV溶解液，分成9份，每份100ml，按表2.5和表2.6配組進(jìn)行正交試驗(yàn)。每份樣品反應(yīng)結(jié)束后繼續(xù)攪拌2小時(shí)，靜置4小時(shí)，再對(duì)9份樣品進(jìn)行0.22μm濾膜過濾，過濾上清為組分IV-1上清，準(zhǔn)確計(jì)量體積后，取樣測(cè)蛋白質(zhì)含量和純度，計(jì)算出組分IV-1上清中白蛋白的量，以白蛋白的量作為試驗(yàn)結(jié)果并進(jìn)行方差分析。

第二章從組分IV沉淀中分離提純?nèi)搜椎鞍椎墓に囇芯?0圖2.3不同濃度的氯化鈉溶液透析對(duì)白蛋白溶液中鋁離子含量的影響Figure2.3EffectofDifferentConcentrationsofSodiumChlorideSolutiononAluminumIonContentinAlbuminSolution3討論3.1工藝最佳條件的確定由于組分IV沉淀蛋白質(zhì)種類多，與白蛋白沉淀相似的雜蛋白也較多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，PKA含量高，組分IV沉淀作為起始材料，在實(shí)驗(yàn)室獲得成功的實(shí)驗(yàn)有時(shí)難以放大至生產(chǎn)規(guī)模。通過大量的試驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比，同時(shí)，也為了驗(yàn)證所選取最佳條件組合的效果，我們逐步確定了從組分IV沉淀中提取分離人血白蛋白的生產(chǎn)流程，以低溫乙醇法為分離主要方法，經(jīng)超濾、巴氏病毒滅活，獲得在同類藥品內(nèi)在的高質(zhì)量，安全性、穩(wěn)定性符合消費(fèi)者預(yù)期的生物制品。組分IV沉淀溶解的最佳條件為pH值6.4、乙醇濃度25%，溫度0℃，其中影響因素最大的為pH值和乙醇濃度；組分IV-1的分離的最佳條件為pH值6.4、乙醇濃度38%，溫度-5.5℃，其中影響因素最大的為pH值；組分IV-2的分離的最佳條件為pH值5.7、乙醇濃度42%，溫度-6.0℃，其中影響因素最大的為pH值。3.2降低人血白蛋白制品中鋁離子的含量應(yīng)用低溫乙醇法制備的人血白蛋白，由于乙醇、助濾劑、原輔料會(huì)引入乙醇、金屬離子等，為了達(dá)到靜脈注射的要求，脫鹽、脫醇就顯得很有必要。目前，國(guó)內(nèi)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3047091