目的:純化原核表達(dá)的剛地弓形蟲(chóng)棒狀體17蛋白（Rhoptry protein17,ROP17）,制備其多克隆抗體,并進(jìn)行效價(jià)和免疫源性鑒定。構(gòu)建二氫葉酸還原酶-胸苷酸合成酶-TgROP17真核表達(dá)載體（pIRES/TgDHFR-TS-TgROP17）,轉(zhuǎn)染人胚腎細(xì)胞（HEK 293T）中,血清饑餓后對(duì)ROP17參與自噬調(diào)控的作用及其機(jī)制進(jìn)行初步研究。方法:第一部分:將重組質(zhì)粒pGEX-6P-1-ROP17轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21（DE3）,并用異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)表達(dá)。通過(guò)親和層析法純化重組蛋白（GST-ROP17）,純化蛋白免疫SD大鼠,制備多克隆抗體,并用蛋白質(zhì)印跡（Western blotting）對(duì)其進(jìn)行免疫源性鑒定。第二部分:以弓形蟲(chóng)速殖子總RNA為模板,構(gòu)建重組載體pIRES/TgDHFR-TS和重組質(zhì)粒pIRES/TgDHFR-TS-TgROP17。經(jīng)菌液PCR、雙酶切和測(cè)序鑒定后,將重組載體轉(zhuǎn)染人胚腎細(xì)胞（HEK 293T）,RT-PCR和Western blotting檢測(cè)基因和蛋白的表達(dá)。第三部分:通過(guò)免疫組化觀察感染弓形蟲(chóng)BALB/c小鼠的腦組織中自... 

【文章來(lái)源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ROP17重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)Fig1-1InducedexpressionofrecombinantROP17protein

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文14圖1-2純化ROP17蛋白的分析M:蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)分子量1：純化的ROP17蛋白Fig1-2AnalysisofpurifiedROP17proteinM:proteinstandardmolecularweight1:purifiedGST-ROP17protein2.3ELISA檢測(cè)多克隆抗體效價(jià)純化的ROP17蛋白三次免疫SD大鼠后，腹主動(dòng)采血法采集血清，ELISA法檢測(cè)多克隆抗體的效價(jià)，第三次免疫后的多克隆抗體效價(jià)＞1：512000，檢測(cè)結(jié)果（表1.1及圖1-2.3）所示：表1.1ELISA法檢測(cè)抗體效價(jià)圖1-3ELISA法檢測(cè)抗體效價(jià)結(jié)果SD大鼠抗體效價(jià)Fig1-3ResultsofantibodytiterdetectedbyELISAAntibodytiterofSDrats抗體效價(jià)陰性對(duì)照空白對(duì)照1：10001:20001:40001:80001:160001:320001:640001:1280001:2560001:512000大鼠0.18760.18622.21082.08791.67101.29340.94550.63500.47190.37480.27260.2638

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文14圖1-2純化ROP17蛋白的分析M:蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)分子量1：純化的ROP17蛋白Fig1-2AnalysisofpurifiedROP17proteinM:proteinstandardmolecularweight1:purifiedGST-ROP17protein2.3ELISA檢測(cè)多克隆抗體效價(jià)純化的ROP17蛋白三次免疫SD大鼠后，腹主動(dòng)采血法采集血清，ELISA法檢測(cè)多克隆抗體的效價(jià)，第三次免疫后的多克隆抗體效價(jià)＞1：512000，檢測(cè)結(jié)果（表1.1及圖1-2.3）所示：表1.1ELISA法檢測(cè)抗體效價(jià)圖1-3ELISA法檢測(cè)抗體效價(jià)結(jié)果SD大鼠抗體效價(jià)Fig1-3ResultsofantibodytiterdetectedbyELISAAntibodytiterofSDrats抗體效價(jià)陰性對(duì)照空白對(duì)照1：10001:20001:40001:80001:160001:320001:640001:1280001:2560001:512000大鼠0.18760.18622.21082.08791.67101.29340.94550.63500.47190.37480.27260.2638


本文編號(hào)：3009600