研究目的明確TGF-β1能否誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞株EMT的發(fā)生;在EMT過(guò)程中,研究TGF-β1與miR-200c之間存在何種聯(lián)系;最后觀察miR-200c的表達(dá)與TGF-β1誘導(dǎo)的EMT的相關(guān)性。研究方法1.相同濃度TGF-β1誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞株SGC-7901不同時(shí)間,Western-blot法檢測(cè)EMT相關(guān)標(biāo)志蛋白表達(dá)情況,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力;2.建立SGC-7901細(xì)胞EMT模型后,定量PCR技術(shù)檢測(cè)TGF-β1對(duì)miR-200c表達(dá)量的影響;3.通過(guò)脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方式人為過(guò)表達(dá)miR-200c,并用TGF-β1進(jìn)行誘導(dǎo),顯微鏡觀察胃癌細(xì)胞形態(tài),Western-blot法檢測(cè)EMT相關(guān)標(biāo)志蛋白表達(dá)情況變化研究結(jié)果1.相同濃度TGF-β1（10ng/ml）誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞0 h、12 h、24 h、36 h,Western-blot法結(jié)果顯示:上皮標(biāo)志蛋白E-cadherin表達(dá)隨時(shí)間增加下降,間充質(zhì)標(biāo)志蛋白Vimentin表達(dá)隨時(shí)間增加而增加,CCK-8法結(jié)果顯示:TGF-β1處理組在0 h、12 h、24 h、36 h細(xì)胞增殖能力相比對(duì)照組也升高;胃癌EMT體外細(xì)胞模型建立成功。2... 

【文章來(lái)源】： 韓博強(qiáng) 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

顯微鏡下觀察TGF-β1刺激后上皮細(xì)胞形態(tài)變化（100×）

miR-200c對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞株上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的抑制作用195.2TGF-β1誘導(dǎo)SGC-7901細(xì)胞株后，CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力變化利用CCK-8實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞增殖能力進(jìn)行檢測(cè)，以CK為對(duì)照，發(fā)現(xiàn)TGF-β1處理SGC-7901細(xì)胞株12h、24h、36h時(shí)增殖細(xì)胞數(shù)明顯多于CK組，其增殖能力顯著上升，且36h時(shí)與CK組的差異最為明顯（圖2）。圖2CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力（與0h對(duì)比，**P＜0.01）5.3TGF-β1誘導(dǎo)SGC-7901細(xì)胞株后，WB實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞中EMT相關(guān)分子的表達(dá)TGF-β1誘導(dǎo)刺激不同時(shí)間后行凝膠電泳，測(cè)定E-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)情況，結(jié)果顯示：以GAPDH蛋白為標(biāo)準(zhǔn)，隨著誘導(dǎo)時(shí)間的增加E-cadherin蛋白的表達(dá)逐漸降低，而Vimentin蛋白的表達(dá)則逐漸升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明在分子蛋白水平TGF-β1促進(jìn)了SGC-7901細(xì)胞的EMT，使細(xì)胞由上皮細(xì)胞表型向間質(zhì)細(xì)胞表型發(fā)生改變（圖3）。

miR-200c對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞株上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的抑制作用20圖3WB檢測(cè)E-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)（與CK組對(duì)比，＊＊示P<0.01）6.討論腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤相關(guān)死亡的主要原因，EMT被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵細(xì)胞過(guò)程，也是研究腫瘤轉(zhuǎn)移的理想模型[19]。研究證實(shí)，在一些因素的作用下，上皮細(xì)胞極性喪失，細(xì)胞間黏附連接和緊密連接丟失，細(xì)胞因此獲得了遷移性和浸潤(rùn)性，細(xì)胞表型也隨之向間質(zhì)細(xì)胞變化，這種改變被稱之為EMT[20,21]。在EMT過(guò)程中，間充質(zhì)樣表型出現(xiàn)的可能原因?yàn)椋杭?xì)胞接觸通過(guò)調(diào)控和表觀遺傳機(jī)制的共同作用而被破壞、細(xì)胞的極性取向受損以及肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重新排列[22]。這提高了細(xì)胞遷移和入侵的能力，其不僅在發(fā)育過(guò)程中起著關(guān)鍵的作用，而且還參與組織愈合、器官纖維化和癌癥發(fā)生等過(guò)程[23]。EMT在胃癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用。He等人[24]的研究表明EMT

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PI3K/AKT通路及miR-200c在胃癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用[J]. 李蓋天,李洪濤,曹廷寶,魏登文,孔延龍,劉宏斌.  世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘. 2019(32)



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