目的:侵襲性念珠菌�。╥nvasive candidiasis,IC）是一種臨床癥狀和體征不典型,且發(fā)病率和病死率逐年增高的感染性疾病。早期的診斷和治療有助于提高患者生存率并改善患者預(yù)后。本研究擬構(gòu)建核酸序列依賴擴(kuò)增（nucleic acid sequence-based amplification,NASBA）技術(shù)檢測(cè)念珠菌,用于快速診斷IC,并結(jié)合G試驗(yàn)和血培養(yǎng)結(jié)果,確定實(shí)驗(yàn)室診斷IC的最佳方案。方法:首先確定針對(duì)念珠菌屬18S rRNA的高度保守序列的引物,建立NASBA結(jié)合電泳檢測(cè)白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株（ATCC14053）的方法,并對(duì)其靈敏度和特異性進(jìn)行評(píng)估。然后,參照EORTC/MSG對(duì)侵襲性真菌病定義的標(biāo)準(zhǔn),擬定IC陽(yáng)性病例組和排除IC的陰性對(duì)照組的納入標(biāo)準(zhǔn),收集并最終納入統(tǒng)計(jì)38例臨床樣本（病例組18例（確診15例,擬診3例）,對(duì)照組20例）,應(yīng)用本研究構(gòu)建的NASBA法進(jìn)行檢測(cè),收集所有病例的血培養(yǎng)和G試驗(yàn)檢查結(jié)果,并計(jì)算三種方法的診斷性能參數(shù)。結(jié)果:NASBA產(chǎn)物電泳結(jié)果顯示臨床七種不同的念珠菌（白色念珠菌、熱帶念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、都柏林念珠菌、... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

NASBA法結(jié)合電泳檢測(cè)白色念珠菌的靈敏度評(píng)價(jià)Fig1.1SensitivityevaluationofNASBAcombinedwithelectrophoresisassayfordetecting

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文14圖1.1NASBA法結(jié)合電泳檢測(cè)白色念珠菌的靈敏度評(píng)價(jià)Fig1.1SensitivityevaluationofNASBAcombinedwithelectrophoresisassayfordetectingCandidaalbicans注：M為DL5000bpmarker，1-6分別為電泳檢測(cè)NASBA擴(kuò)增105CFU/ml、104CFU/ml、103CFU/ml、102CFU/ml、101CFU/ml、1CFU/ml白色念珠菌的結(jié)果。3.2特異性評(píng)價(jià)如圖1.2和圖1.3所示，本次實(shí)驗(yàn)建立的NASBA結(jié)合電泳法檢測(cè)7種不同念珠菌株呈陽(yáng)性結(jié)果，而其他非念珠菌真菌及細(xì)菌均呈陰性結(jié)果。表明特異性良好。圖1.2念珠菌屬不同菌株經(jīng)NASBA擴(kuò)增后的電泳結(jié)果Fig1.2ElectrophoresisresultsofdifferentspeciesofCandidaamplifiedbyNASBA注：M為DL500bpmarker，1-7分別為電泳檢測(cè)NASBA擴(kuò)增白色念株菌ATCC14053、近平滑念珠菌ATCC22019、克柔念珠菌ATCC6258、熱帶念珠菌（臨床分離菌株）、光滑念珠菌ATCC2950、都柏林念珠菌（臨床分離菌株）、季也蒙念珠菌（臨床分離菌株）的菌株RNA結(jié)果。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文15圖1.3各種非念珠菌屬菌株經(jīng)NASBA擴(kuò)增后的電泳結(jié)果Fig1.3Electrophoresisresultsofvariousnon-CandidastrainsamplifiedbyNASBA注：M為DL1000bpmarker，1-9分別為電泳檢測(cè)NASBA擴(kuò)增新型隱球菌（臨床分離菌株）、煙曲霉（ATCCMYA-3626）、金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌（ATCC27853）、紋帶棒狀桿菌（臨床分離菌株）、艱難梭菌（ATCC43255）、新型隱球菌（臨床分離菌株）、煙曲霉（ATCCMYA-3626）的菌株RNA結(jié)果。4討論念珠菌是一種廣泛存在于自然界，同時(shí)也是寄居在人體最常見的真菌。一般認(rèn)為，念珠菌是人體皮膚、口腔、陰道、胃腸道等與外界相通部位的正常菌群成員，不會(huì)導(dǎo)致深部器官或組織感染。當(dāng)人體免疫力低下、生理屏障破壞、菌群失調(diào)時(shí)，念珠菌可侵入人體組織、器官、血液，導(dǎo)致IC的發(fā)生[3,28,29]。及時(shí)、準(zhǔn)確診斷IC是指導(dǎo)臨床正確管理IC患者的關(guān)鍵。傳統(tǒng)的念珠菌培養(yǎng)法和組織病理學(xué)檢查存在檢驗(yàn)周期長(zhǎng)和敏感性低的缺陷，某些情況下還需對(duì)患者進(jìn)行侵入性操作才能采集標(biāo)本送檢。檢測(cè)血清標(biāo)志物BDG在一定程度可降低檢驗(yàn)周轉(zhuǎn)時(shí)間，達(dá)到早期、快速的診斷需求，但其診斷IC的假陽(yáng)性問題突出，不能滿足臨床準(zhǔn)確診斷IC的需求。分子檢測(cè)技術(shù)是診斷感染性疾病的發(fā)展方向，傳統(tǒng)PCR法存在復(fù)雜的熱變性過程，對(duì)儀器設(shè)備的精密程度要求較高，且存在外源性DNA污染的問題，盡管目前多種基于PCR的分子診斷技術(shù)被研發(fā)用于診斷IC，但尚無標(biāo)準(zhǔn)化操作程序[5]。NASBA技術(shù)相較于PCR技術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于以單鏈RNA為模板，在AMV逆轉(zhuǎn)

【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]核酸序列依賴擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)侵襲性曲霉菌感染的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 王立朋.重慶醫(yī)科大學(xué) 2014
[2]基于NASBA技術(shù)檢測(cè)細(xì)菌耐藥性方法的建立[D]. 賀爾娜.寧波大學(xué) 2014



本文編號(hào)：2990319