目的收集并純化間充質干細胞來源的微顆粒（MSC-MPs）,觀察其對過氧化氫（H2O2）誘導H9C2心肌細胞損傷的保護作用,并初步研究其機制。方法使用全骨髓貼壁法分離純化MSCs,運用顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化、流式細胞術鑒定表面抗原、細胞計數(shù)法繪制細胞生長曲線以及誘導MSCs成骨和成脂分化四種方法來對MSCs進行鑒定。使用無血清培養(yǎng)基處理第5代MSCs 48 h,收集上清液后梯度離心獲取MSCMPs。利用BCA法檢測MSC-MPs的蛋白含量,利用流式細胞術檢測MSC-MPs的大小、數(shù)量和表面抗原。使用80μmol·L-1的H2O2處理細胞3 h,誘導H9C2細胞氧化應激損傷模型,研究24和48μg·ml-1的MSC-MPs預處理H9C2心肌細胞24 h以后,其對細胞存活率、細胞釋放的乳酸脫氫酶等指標的影響,包括:使用CCK-8法檢測細胞存活率,使用檢測試劑盒分別檢測細胞中的MDA、SOD、GSH-Px以及細胞LDH釋放量,運用JC-1檢測試劑盒和ROS檢測試劑盒檢測ROS相對含量和線粒體膜電位水平,使用Caspase-3檢測試劑盒和Caspase-9檢測試劑盒檢測細胞中Caspase-3... 

【文章來源】： 馬瑞君 山西醫(yī)科大學

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

骨髓間充質干細胞釋放微顆粒示意圖

山西醫(yī)科大學碩士學位論文112結果2.1MSCs的形態(tài)學特征從大鼠股骨和脛骨內(nèi)提取的第0代MSCs大小和形態(tài)各異，但是第0代細胞經(jīng)過10d左右的換液后較小的紅細胞和其他血細胞的數(shù)量逐漸減少，MSCs呈現(xiàn)出典型的“紡錘樣”和“魚群狀”排列，MSCs在首次傳代后生長速度顯著增快，6d左右即可達到融合率90％左右，MSCs培養(yǎng)到第2代時雜細胞含量較少，即獲得到高純度的MSCs。圖2-1大鼠MSCs的形態(tài)學特征A：分離24h后的MSCs；B：48h后首次換液時的MSCs；C：第1代MSCs；D：第2代的MSCs；E：第3代的MSCs；F：第6代的MSCs。2.2MSCs的生長曲線使用第5代MSCs進行實驗，生長曲線呈“S”型，MSCs在接種后的24h內(nèi)生長速度緩慢，在第2天到第7天生長速度顯著增快，呈指數(shù)速度生長，在第7天，細胞數(shù)量接近飽和，生長速度顯著降低，到達平臺期。

第5代MSCs細胞生長曲線


本文編號：2963812