動脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）是一種由膽固醇含量非常豐富的巨噬細胞在動脈壁異常積聚所致脂質代謝不均衡和適應性免疫反應的復雜慢性炎癥性疾病。主動脈內膜下巨噬細胞逐步泡沫化不僅是動脈粥樣硬化的關鍵因素之一,也是其發(fā)病的早期標志。抑制泡沫化進程可以防治AS發(fā)展的觀點已得到學界廣泛共識。梔子苷（Geniposide,Gen）是茜草科植物梔子的成熟果實中提取的主要藥用成分之一,已知梔子苷具有抗AS的作用,但是其機制尚不清楚。本文主要研究了梔子苷能否通過抑制泡沫細胞的形成而發(fā)揮其動脈粥樣硬化的防治作用,并闡明其可能分子機制。我們使用LPA處理Raw264.7細胞使其泡沫化,建立了穩(wěn)定的泡沫細胞模型。通過指定濃度劑量的梔子苷處理Raw264.7細胞后,CCK-8法檢測細胞活力。通過細胞總膽固醇檢測試劑盒和油紅O染色比較梔子苷處理前后對巨噬源性泡沫細胞的形成的抑制情況。通過WB和RT-PCR等技術檢測脂質轉運相關蛋白及mRNA表達水平,并進一步探討其可能機制。此外,以高脂飼料飼養(yǎng)ApoE^-/-小鼠16周,而構建了動物AS模型。在后四周以不同劑量的梔子苷治療A... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

LPA誘導Raw264.7泡沫細胞的形成

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文21圖2.梔子苷濃度梯度對Raw264.7巨噬細胞存活率的影響。Fig.2.EffectsofgeniposideconcentrationgradientonsurvivalrateofRaw264.7macrophages.注：NS表示沒有統(tǒng)計學差異（p>0.05）。2.3梔子苷劑量依賴性地抑制巨噬源性泡沫細胞的形成。動脈血管內膜中巨噬源性泡沫細胞的形成是動脈粥樣硬化病變早期的主要標志[9]。為了研究子苷對泡沫細胞形成的潛在影響，將Raw264.7巨噬細胞用LPA處理及不同濃度的梔子苷（50、100、200μg/ml）處理24h。然后對Raw264.7細胞進行油紅O染色和總膽固醇酯/膽固醇定量測定。如圖3A和3B所示，與對照組相比，梔子苷治療組Raw264.7細胞內脂質滴的數(shù)量呈現(xiàn)劑量依賴性地顯著減少。如圖3C所示，通過細胞內膽固醇酯測定實驗表明，用梔子苷處理后，與對照組相比細胞內膽固醇酯明顯減少�？傊@些結果表明，梔子苷劑量依賴性地有效抑制Raw264.7巨噬源性泡沫細胞的形成。在后續(xù)的實驗中我們將進一步探究梔子苷抑制巨噬源性泡沫細胞形成的可能機制。

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文22圖3.梔子苷以劑量依賴性方式抑制泡沫細胞的形成。（A）通過油紅O染色觀察梔子苷處理對細胞內脂滴的影響。（B）油紅O染色的定量分析。（C）梔子苷處理對細胞內膽固醇酯的量的影響。(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)Fig.3.Geniposideinhibitstheformationoffoamcellsinadose-dependentmanner.Raw264.7macrophageswasexposedto200mMLPAfor24hinthepresenceorabsenceofdifferentconcentrationsof50,100or200μg/mlgeniposide.(A)Raw264.7cellswerestainedwithOilRedO.(B)QuantificationofoilredOstaining.(C)Thecholesterol/cholesterolesterassaywasmeasured.(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)2.4梔子苷對Raw264.7巨噬細胞內脂質轉運相關蛋白表達的影響。考慮到梔子苷能夠有效的抑制泡沫細胞的形成，我們進一步研究了梔子苷對于膽固醇轉運相關蛋白ABCG1、ABCA1和清道夫受體SR-A、CD36及SR-B1的mRNA和蛋白質表達的影響。如圖4A和4B所示，與僅用LPA誘導的Raw264.7巨噬細胞泡沫化模型組相比，梔子苷治療組中SR-A的mRNA水平明顯下調，ABCA1和SR-B1的mRNA水平上調。而ABCG1/CD36的mRNA水平均無明顯


本文編號：2926854