目的:探討膿毒癥急性肺損傷（ALI）時miR-155-5P對肺泡巨噬細胞白介素-6（IL-6）、巨噬細胞炎性蛋白2（MIP-2）表達的調(diào)控作用及中性粒細胞遷移的影響。方法:培養(yǎng)小鼠肺泡巨噬細胞（MH-S）并將其分為對照組、膿毒癥組和miR-155-5P抑制物組,miR-155-5P抑制物組預先通過miR-155-5P antagomir完成轉(zhuǎn)染,采用脂多糖干預膿毒癥組和miR-155-5P抑制物組12 h,應用RT-PCR檢測3組MH-S細胞miR-155-5P、白介素6 mRNA和MIP-2 mRNA的表達,酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測細胞懸液中白介素6和MIP-2的濃度;再次將MH-S分為上述3組培養(yǎng)在Transwell板的下室,CFSE熒光染料標記的中性粒細胞培養(yǎng)在上室,脂多糖干預后應用流式細胞術(shù)分別檢測上室與下室細胞的熒光值,計算中性粒細胞的遷移率。結(jié)果:與對照組相比,膿毒癥組肺泡巨噬細胞的miR-155-5P表達明顯上調(diào)（P<0.05）,IL-6mRNA和MIP-2mRNA的表達也明顯上調(diào)（P<0.05）,同時IL-6、MIP-2的濃度和中性粒細胞遷移率均顯著增加（P&l... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

（瑞氏染色，×400）為顯微鏡下的中性粒細胞

山西醫(yī)科大學碩士學位論文9圖3-3臺盼藍染色后的中性粒細胞（×100）2.3.3CFSE熒光染料標記中性粒細胞CFSE熒光染料可穿透活中性粒細胞的細胞膜，與胞內(nèi)蛋白共價結(jié)合水解后釋放綠色熒光，表示標記完成，見圖3-4、3-5。圖3-4CFSE標記的中性粒細胞（明場）圖3-5CFSE標記的中性粒細胞（暗場）2.3.4流式細胞術(shù)檢測三組中性粒細胞熒光值，計算中性粒細胞遷移率。經(jīng)流式細胞術(shù)分別檢測三組Transwell板上室與下室的細胞熒光值，見圖3-6，其中mean值為所測熒光值，events為所計細胞數(shù)，據(jù)公式：遷移率（%）=下室熒光值/（上室熒光值+下室熒光值）×100%，計算出遷移率結(jié)果顯示：膿毒癥組中性粒細胞遷移率（64.36%）顯著高于對照組（30.98%，χ2=7.542，P<0.05）和miR-155-5P抑制物組（38.32%，χ2=4.437，P<0.05），miR-155-5P抑制物組中性粒細胞遷移率與對照組相比無統(tǒng)計學意義（χ2=0.399，P=0.528）。見圖3-7。

山西醫(yī)科大學碩士學位論文9圖3-3臺盼藍染色后的中性粒細胞（×100）2.3.3CFSE熒光染料標記中性粒細胞CFSE熒光染料可穿透活中性粒細胞的細胞膜，與胞內(nèi)蛋白共價結(jié)合水解后釋放綠色熒光，表示標記完成，見圖3-4、3-5。圖3-4CFSE標記的中性粒細胞（明場）圖3-5CFSE標記的中性粒細胞（暗場）2.3.4流式細胞術(shù)檢測三組中性粒細胞熒光值，計算中性粒細胞遷移率。經(jīng)流式細胞術(shù)分別檢測三組Transwell板上室與下室的細胞熒光值，見圖3-6，其中mean值為所測熒光值，events為所計細胞數(shù)，據(jù)公式：遷移率（%）=下室熒光值/（上室熒光值+下室熒光值）×100%，計算出遷移率結(jié)果顯示：膿毒癥組中性粒細胞遷移率（64.36%）顯著高于對照組（30.98%，χ2=7.542，P<0.05）和miR-155-5P抑制物組（38.32%，χ2=4.437，P<0.05），miR-155-5P抑制物組中性粒細胞遷移率與對照組相比無統(tǒng)計學意義（χ2=0.399，P=0.528）。見圖3-7。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]miR-155對膿毒癥急性肺損傷肺泡巨噬細胞IL-6、IL-10及MIP-2的影響[J]. 付玉梅,周佳偉,劉凱,侯林義,張文凱.  中華重癥醫(yī)學電子雜志(網(wǎng)絡(luò)版). 2019(02)
[2]中國膿毒癥流行病學現(xiàn)狀[J]. 江偉,杜斌.  醫(yī)學研究生學報. 2019(01)

碩士論文
[1]構(gòu)建中性粒細胞自發(fā)凋亡過程lncRNA-miRNA-mRNA內(nèi)源競爭性RNA網(wǎng)絡(luò)篩選中性粒細胞自發(fā)凋亡過程中關(guān)鍵的lncRNA[D]. 江南.西南醫(yī)科大學 2019
[2]膿毒癥時PD-L1調(diào)控中性粒細胞凋亡的作用和機制研究[D]. 郭玉.中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學 2018



本文編號：2922748