目的:篩選鑒定新型小分子GLP-1R激動劑S6對葡萄糖刺激的大鼠胰島素分泌的影響及其機制。方法:1)基于藥效團模型的虛擬篩選與分子對接技術相結合的方法篩選小分子化合物。2)FLIPR^?熒光成像檢測系統檢測篩選化合物與GLP-1R結合后細胞內鈣離子濃度變化。3)胰島素分泌實驗觀察不同條件下的S6對胰島素分泌的作用。4)鈣離子成像技術檢測在不同條件下S6對胰島β細胞內鈣離子濃度的影響。5)全細胞膜片鉗技術探究S6在不同條件下對胰島β細胞電壓依賴性鈣（VDCC）通道、電壓依賴性鉀（Kv）通道以及動作電位時程的影響。6)利用CETSA技術觀察S6對GLP-1R的靶向作用。結果:1)通過虛擬篩選和分子對接結合的方法從ZINC小分子數據庫篩選出5809種化合物,后續(xù)進行基于口服化合物理化性質的篩選,有108種化合物符合要求,最終購買到30個商業(yè)性化合物。2)30個待測化合物中有16個化合物表現出GLP-1R激動效應,其中S6具有最高激動作用。3)胰島素分泌結果表明,S6具有促進大鼠胰島素分泌的作用。4)鈣離子成像技術顯示S6可增加細胞內Ca²⁺濃度。5)... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數】：68 頁

【學位級別】：碩士

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前言
第一部分 小分子GLP-1R激動劑S6 的篩選
    1 材料與方法
        1.1 主要藥品與試劑
        1.2 主要實驗儀器
        1.3 主要溶液的配制
        1.4 計算機研究
        1.5 CHO-K1 細胞的培養(yǎng)
        1.6 鈣離子熒光檢測技術觀察化合物對GLP-1R的激動活性
        1.7 數據處理
    2 結果
        2.1 虛擬篩選和化合物理化性質的計算
        2.2 S6 具有最強的GLP-1R激動作用
    3 討論
    4 結論
第二部分 S6葡萄糖濃度依賴性促進大鼠胰島素分泌及其電生理機制
    1 材料與方法
        1.1 實驗動物
        1.2 主要藥品與試劑
        1.3 主要實驗儀器
        1.4 主要溶液的配制方法
        1.5 大鼠胰島組織的分離與培養(yǎng)
        1.6 大鼠β細胞的分離與培養(yǎng)
        1.7 組織水平上的胰島素分泌實驗
        1.8 全細胞膜片鉗實驗
        1.9 鈣離子成像技術實驗
        1.10 數據處理
    2 結果
        2.1 S6 葡萄糖濃度依賴性的促進胰島素分泌
        2.2 S6 升高β細胞內的鈣離子濃度
        2.3 S6 未影響β細胞電壓依賴性鈣（VDCC）通道
        2.4 S6 抑制β細胞電壓依賴性鉀（Kv）通道,延長動作電位時程
        2.5 Kv通道部分參與S6 介導的胰島素分泌作用
2+濃度升高">        2.6 細胞內鈣庫釋放參與S6 介導的細胞內的Ca²⁺濃度升高
    3 討論
    4 結論
第三部分 GLP-1R介導S6 性促進大鼠胰島素分泌的機制研究
    1 材料與方法
        1.1 實驗動物
        1.2 主要藥品與試劑
        1.3 主要實驗儀器
        1.4 主要溶液的配制方法
        1.5 大鼠胰島組織及β細胞的分離與培養(yǎng)
        1.6 CETSA驗證GLP-1R與 S6 靶向作用
        1.7 觀察GLP-1R對 S6 誘導的胰島素分泌的影響
        1.8 觀察S6 抑制Kv通道電流與GLP-1R的關系
2+濃度的影響">        1.9 觀察GLP-1R對 S6 升高細胞內的Ca²⁺濃度的影響
        1.10 數據處理
    2 結果
        2.1 pEX3-GLP-1R表達載體的鑒定
        2.2 TOB透析式無細胞表達體系GLP-1R蛋白的鑒定
        2.3 GLP-1R是 S6 的特異性靶標
        2.4 S6 通過GLP-1R促進胰島素分泌
2+濃度">        2.5 S6 通過GLP-1R增加β細胞內的Ca²⁺濃度
        2.6 S6 通過GLP-1R抑制Kv通道電流
    3 討論
    4 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
個人簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]胰高血糖素樣肽1（GLP-1）對心血管疾病治療的研究進展[J]. 蔣搖靜,李俊峰,任麗偉,王慶華.  復旦學報(醫(yī)學版). 2018(06)
[2]胰高血糖素樣肽-1在胃腸道中的作用及機制的研究進展[J]. 嚴淋,羅和生.  胃腸病學和肝病學雜志. 2017(08)
[3]GLP-1R結構和功能及小分子藥物篩選研究進展[J]. 胡中平,程念,楊帆,蘇正定.  生物技術通報. 2017(02)
[4]G-蛋白偶聯受體的功能測定和高通量藥物篩選[J]. 許治良,高虹,歐陽克清,鄭旭煦,蔡昭皙,胡應和.  中國藥理學通報. 2003(12)



本文編號：2904010