發(fā)布時間：2020-12-04 23:10

　　海藻酸鈉降解得到的聚甘露糖醛酸（Polymannuronic acid,PM）和聚古羅糖醛酸（Polyguluronic acid,PG）具有優(yōu)良的生物活性。二者生物活性的發(fā)揮與其給藥方式密切相關(guān),而口服給藥系統(tǒng)是各種給藥途徑中最廣泛使用的方式,因此闡明PM和PG的口服轉(zhuǎn)運過程對其生物活性的發(fā)揮具有重要意義。藥物的口服轉(zhuǎn)運途徑主要包括跨細胞途徑和細胞旁途徑:多糖由于分子量（Molecular weight,Mw）大,難以透過細胞間的緊密連接（Tight junction,TJ）,因此細胞旁途徑嚴重限制了其口服轉(zhuǎn)運過程。而多糖的跨細胞途徑包括:從頂膜內(nèi)吞的多糖分子在細胞中內(nèi)化,并最終從基底外側(cè)膜中胞吐。為了研究PM和PG的口服轉(zhuǎn)運機制,本實驗采用異硫氰酸熒光素（Fluorescein isothiocyanate,FITC）標記的方法合成FITC-PM和FITC-PG,然后在Caco-2細胞單層模型上研究了二者的轉(zhuǎn)運機制。具體研究內(nèi)容包括以下幾個方面:1、PM和PG的熒光標記及驗證采用酪胺化學(xué)修飾與FITC綴合的方法合成FITC-PM和F.ITC-PG,瓊脂糖凝膠電泳法和熒光分光光度計法... 

【文章來源】： 王宇 山東大學(xué)

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１瓊脂糖凝膠電泳圖譜

Ｍ．?｜?ＷＯ．??ｉ?ｉ?ｊ??１０－?￣?２５－?！〇〇■??２ＩＮＩ?３（ＭＩ?４００?５ＷＩ?ＭＭＩ?７？Ｉ０?ＭＩＩＯ?３〇〇?４〇〇?５〇〇?６００?７００?８００?２００?３００?４００?５００?６００?７００?８００??Ｗｎｖｒｌｅ？Ｋｌｈ?（ｒｎｎ）?（ｍｍ）??ｓ??４００－??ｉ?３００－??＇明??０?ｉ?．?１?ｒ－＂—Ｉ?ｒ－??２００?ｍ?？？〇〇?？〇〇?ｍ?？〇〇?ｔｏｏ??＞Ｖａｖｃｌｅｎｇ［（ｌｉ?（ｎｍ）??圖２－２通過熒光分光光度法驗證ＰＭ和ＰＧ的熒光標記。激發(fā)波長為４９５ｎｍ下未標記的??ＰＭ?（ａ）?．?ＦＩＴＣ?和未標記的?ＰＭ?（ｂ）?，?ＦＩＴＣ－ＰＭ?（ｃ）?，?ＰＧ?（ｄ），ＦＩＴＣ?和未標記的?ＰＧ?（ｅ），??Ｆ１ＴＣ－ＰＧ?（ｆ）和Ｆ１ＴＣ?（ｇ）的熒光光譜。??２．３．３焚光標記前后分子量的測定結(jié)果??通過酪胺化學(xué)修飾然后與ＨＴＣ綴合來成功合成了?ＦＩＴＣ－ＰＭ和ＦＩＴＣ－ＰＧ，??之后用高效凝膠滲透色譜法測定了熒光標記前后ＰＭ和ＰＧ的Ｍｗ變化情況。??Ｍｗ測定的結(jié)果表明，標記后ＰＭ和ＰＧ的Ｍｗ都稍微增大（圖２－３?（ａ－ｄ）），這??表明可能有少量的酪胺和ＦＩＴＣ基團已綴合到ＰＭ和ＰＧ分子上。??１５??

ａ??ｍＡＵ??：：?Ａ??３０?－?Ｉ?人??ｌ?Ｍ＇?ｉ?！??〇－??－—二?＾??０?５?１０?１５?酬??ｂ?Ｐ＼１．Ｍｗ－１６．４５ｋＤ??ｍＡＵ?１?ｊｓ??，；ｊ??ｒｔ?＜５?ｍ?ｉｒ?ｍｉｎ??Ｆ１ＴＣ－ＰＭ：?Ｍｗ－１６．８０ｋＤ??１??０?ｓ?１０?ｍｉｎ??ＰＧ；?Ｍｗ＊＝?１０．６５?ｋＤ??ｄ??Ｌ?Ａｎ??丨丨?５?ｉｏ?ｉｓ?ｍｉｎ??ＨＴＣ－ＰＧ：?Ｍｗ＝１１．８９ｋＤ??圖２－３通過高效凝膠滲透色譜法測定Ｍｗ。Ｍｗ測定ＰＭ?（ａ），?ＦＩＴＣ－ＰＭ?（ｂ），ＰＧ?（ｃ），??ＦＩＴＣ－ＰＧ?（ｄ）；葡聚糖的回歸方程為?ｌｏｇＭｗ＝－０．４２０７ｔ?＋?８．９９５９?（Ｒ２?＝?０．９９９９）。??２．３．４熒光標記率的測定結(jié)果??最后測定了?ＦＩＴＣ－ＰＭ和ＦＩＴＣ－ＰＧ的熒光標記率ＲＬ?（％）。結(jié)果如表２－２所??示，本實驗使用了商品化的ＦＩＴＣ－轉(zhuǎn)鐵蛋白和ＦＩＴＣ－葡聚糖作為陽性對照，并測??定了它們的平均熒光標記率Ｒｌ?（％），分別為９８．４９％和５２．５１°／。。而ＦＩＴＣ－ＰＭ和??ＦＩＴＣ－ＰＭ的平均熒光標記率ＲＬ?（％）較低，僅為１２．６６％和９．５２％，這與高效液??相色譜法測定的熒光標記后Ｍｗ的稍微增大結(jié)果相一致，因為僅有少量的酪胺和??ＦＩＴＣ綴合到ＰＭ和ＰＧ分子上。上述結(jié)果表明，ＰＭ和ＰＧ已成功被ＦＩＴＣ標記，??可用于后續(xù)實驗。??１６??


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