【摘要】：肝臟在內(nèi)源性物質(zhì)代謝及外源性物質(zhì)代謝和清除毒素過程中起著重要作用。慢性肝臟炎癥經(jīng)常伴隨一個(gè)共同病理改變是細(xì)胞外間質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的過度合成與異常沉積,即肝纖維化(hepatic fibrosis)。與此相對應(yīng)的是,慢性刺激導(dǎo)致肝臟不斷地再生,進(jìn)而導(dǎo)致肝臟實(shí)質(zhì)結(jié)構(gòu)和血管構(gòu)成(門脈系統(tǒng)和肝靜脈系統(tǒng))的紊亂,形成肝臟再生結(jié)節(jié),即所謂的肝硬化。長期慢性肝損傷最終可引起肝硬化甚至肝衰竭或者肝癌的發(fā)生。肝損傷過程中伴隨著Raf-1/MEK/ERK1,2信號(hào)通路的激活。Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)是一個(gè)在信號(hào)通路Raf-1/MEK/zERK1,2中起負(fù)向調(diào)節(jié)作用因子,也可以抑制NF-κB信號(hào)通路的活性。我們前期的研究證明,RKIP在肝臟纖維化組織表達(dá)下降,隨著HSC的活化,RKIP的表達(dá)也明顯降低,RKIP可以抑制HSC細(xì)胞增殖,但卻促進(jìn)其遷移。本課題組進(jìn)一步研究證實(shí)RKIP還可以減少HSC在基質(zhì)膠原的黏附。Locostatin是RKIP活性抑制劑,是一種無抗菌活性的黃惡唑酮衍生物。Lin X等通過用Locostatin干預(yù)肝纖維化模型證實(shí)肝纖維化后RKIP表達(dá)下降,香風(fēng)草甙(Didymin)可通過上調(diào)RKIP表達(dá)緩解肝纖維化。而本課題組前期的研究初步證實(shí)Locostatin可以減少肝臟損傷,但是Locostatin對肝臟炎癥的抑制作用認(rèn)識(shí)不清楚。目的:本論文主要探討Locostatin對四氯化碳小鼠肝臟炎癥的影響及機(jī)制。方法:將30只小鼠隨機(jī)分為正常對照組,四氯化碳模型組,Locostatin干預(yù)組。通過檢測血清中谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate transaminase,AST)、肝臟組織HE染色和MPO含量來判斷肝臟炎癥程度的變化,通過組織羥脯氨酸(hydroxyproline,HYP)及肝組織Masson染色研究膠原纖維的變化。運(yùn)用酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)測定T-SOD和MDA分析肝組織脂質(zhì)過氧化情況。結(jié)果:1locostatin可以減輕肝臟病理組織炎癥活動(dòng)度正常對照組在干預(yù)1天后處死的5只小鼠其中4只可見肝臟組織結(jié)構(gòu)正常,匯管區(qū)完整,無擴(kuò)大,肝細(xì)胞排列整齊、大小均勻,肝索結(jié)構(gòu)清晰,肝細(xì)胞索以中央靜脈為中心向四周呈放射狀排列,肝細(xì)胞無脂肪變性以及炎細(xì)胞浸潤,但是有1只小鼠肝組織可見點(diǎn)灶狀壞死。正常對照組在干預(yù)2天后處死的5只小鼠其中4只可見肝臟組織結(jié)構(gòu)正常,肝細(xì)胞排列整齊、大小均勻,肝索結(jié)構(gòu)清晰,肝細(xì)胞索以中央靜脈為中心向四周呈放射狀排列,肝細(xì)胞無脂肪變性以及炎細(xì)胞浸潤,匯管區(qū)完整。四氯化碳模型組在干預(yù)1天后處死的小鼠匯管區(qū)擴(kuò)大明顯,有大量炎性細(xì)胞浸潤,間隔周圍界面炎明顯,3帶壞死并可見p-c橋接壞死。肝細(xì)胞脂肪變性、壞死很常見。四氯化碳模型組在干預(yù)2天后處死的小鼠較干預(yù)1天后處死的小鼠匯管區(qū)炎癥稍微減輕,有大量炎性細(xì)胞浸潤,間隔周圍界面炎明顯,偶見p-c橋接壞死。肝細(xì)胞脂肪變性很常見,并可見點(diǎn)灶狀壞死。locostatin干預(yù)組小鼠相對于四氯化碳模型組小鼠炎癥相對比較局限,間隔周圍界面炎不太明顯,偶見p-c橋接壞死,肝小葉結(jié)構(gòu)相對清晰,肝細(xì)胞脂肪變性很常見,并可見點(diǎn)灶狀壞死,locostatin干預(yù)組2天后處死的小鼠較1天后處死的小鼠肝臟炎癥有所減輕。2locostatin可以減輕肝臟病理組織肝纖維化分期masson染色后可以較清晰地顯示肝組織膠原纖維,肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞染色為紅色,膠原染色為藍(lán)色。正常對照組在干預(yù)1天后處死的5只小鼠和2天后處死的5只小鼠藍(lán)色膠原纖維主要沉積在血管壁和匯管區(qū)。四氯化碳模型組在干預(yù)1天后處死的小鼠和干預(yù)2天后處死的小鼠肝臟組織膠原纖維沉積明顯增多,匯管區(qū)擴(kuò)大明顯,纖維間隔形成并深入到肝小葉內(nèi),肝小葉結(jié)構(gòu)不完整,肝竇可見較多藍(lán)色纖維沉積。locostatin干預(yù)組在干預(yù)1天后處死的小鼠和干預(yù)2天后處死的小鼠匯管區(qū)有纖維結(jié)締組織增生,擴(kuò)大不明顯,纖維沉積較模型組纖細(xì),肝小葉結(jié)構(gòu)較模型組相對清晰一些,肝竇偶見藍(lán)色纖維沉積。3血清alt和ast指標(biāo)的檢測四氯化碳模型組在末次給藥后2天后處死的血清alt含量和比四氯化碳模型組在末次給藥后1天后處死的血清alt含量明顯降低(163.53u/l±41.18u/lvs214.33u/l±0.85u/l,p0.05,n=5)。locostatin干預(yù)組在末次給藥后2天后處死的血清alt含量和比locostatin組在末次給藥后1天后處死的血清alt含量也明顯降低(163.53u/l±41.18u/lvs214.33u/l±0.85u/l,p0.05,n=5)。正常對照組,四氯化碳模型組和locostatin干預(yù)組三組小鼠在末次給藥1天后處死的血清ast含量分別為81.78u/l±9.52u/l,163.93u/l±32.94u/l,133.47u/l±4.28u/l。四氯化碳模型組小鼠血清ast含量均比正常對照組小鼠血清ast含量增高(p0.01,n=5),locostatin干預(yù)組小鼠血清ast含量均比正常對照組小鼠血清ast含量增高(p0.05,n=5)。正常對照組,四氯化碳模型組和locostatin干預(yù)組三組小鼠在末次給藥后2天后處死的血清ast含量分別為65.70u/l±16.71u/l,119.90u/l±40.20u/l,100.72u/l±24.23u/l。四氯化碳模型組小鼠血清ast含量均比正常對照組小鼠血清ast含量增高(p0.01,n=5),locostatin干預(yù)組小鼠血清ast含量均比正常對照組小鼠血清ast含量增高(p0.05,n=5)。四氯化碳模型組在末次給藥后2天后處死的血清ast含量和比四氯化碳模型組在末次給藥后1天后處死的血清ast含量明顯降低(119.90u/l±40.20u/lvs163.93u/l±32.94u/l,p0.05,n=5)。4肝組織sod結(jié)果正常對照組,四氯化碳模型組和locostatin干預(yù)組三組均在在末次給藥后2天后處死的小鼠肝組織t-sod含量比在末次給藥后1天后處死的小鼠肝組織t-sod含量明顯降低分別為(253.10u/mg±19.87u/mgvs276.06u/mg±17.61u/mg,p0.05,n=5)、(237.36u/mg±28.35u/mgvs260.41u/mg±37.70u/mg,p0.05,n=5)和(235.25u/mg±13.09u/mgvs268.21u/mg±25.92u/mg,p0.01,n=5)。5肝組織mda結(jié)果四氯化碳模型組在末次給藥后2天后處死的肝組織mda含量和比四氯化碳模型組在末次給藥后1天后處死的肝組織mda含量明顯降低(5.14μmol/g±1.18μmol/gvs6.15μmol/g±0.79μmol/g,p0.05,n=5)。6肝組織MPO結(jié)果正常對照組,四氯化碳模型組和Locostatin干預(yù)組三組小鼠在末次給藥后2天后處死的肝組織MPO含量分別為1.34U/g±0.12U/g,2.00U/g±0.88U/g,1.27U/g±0.16 U/g。其中四氯化碳模型組和正常對照組小鼠相比肝組織MPO含量明顯增加(P0.01,n=5),四氯化碳模型組小鼠在給予Locostatin干預(yù)后肝組織MPO含量明顯降低(P0.01,n=5)。四氯化碳模型組在末次給藥后2天后處死的肝組織MPO含量和比四氯化碳模型組在末次給藥后1天后處死的肝組織MPO含量明顯升高(2.00U/g±0.88 U/g vs 1.64U/g±0.13 U/g,P0.05,n=5)。7肝組織羥脯氨酸含量的結(jié)果正常對照組,四氯化碳模型組和Locostatin干預(yù)組三組小鼠在末次給藥1天后處死的肝組織羥脯氨酸含量分別為202.15μg/g±7.29μg/g,254.65μg/g±25.52μg/g,231.43μg/g±15.45μg/g。其中四氯化碳模型組和正常對照組小鼠相比肝組織羥脯氨酸含量明顯增加(P0.01,n=5),四氯化碳模型組小鼠在給予Locostatin干預(yù)后肝組織羥脯氨酸含量明顯降低(P0.01,n=5)。但是四氯化碳模型組小鼠在給予Locostatin干預(yù)后肝組織羥脯氨酸含量仍然比正常對照組高(P0.01,n=5)。正常對照組,四氯化碳模型組和Locostatin干預(yù)組三組小鼠在末次給藥后2天后處死的肝組織羥脯氨酸含量分別為191.98μg/g±5.59μg/g,243.27μg/g±29.32μg/g,208.56μg/g±19.35μg/g。其中四氯化碳模型組和正常對照組小鼠相比肝組織羥脯氨酸含量明顯增加(P0.01,n=5)四氯化碳模型組小鼠在給予Locostatin干預(yù)后肝組織羥脯氨酸含量明顯降低(P0.01,n=5)。Locostatin組在末次給藥后2天后處死的肝組織羥脯氨酸含量和比Locostatin組在末次給藥后1天后處死的肝組織羥脯氨酸含量明顯降低(208.56μg/g±19.35μg/g vs 231.43μg/g±15.45μg/g,P0.05,n=5)。結(jié)論:Locostatin可以減少炎癥細(xì)胞浸潤,減輕四氯化碳引起的小鼠肝臟組織炎癥,進(jìn)而延緩緩解四氯化碳引起的小鼠肝組織纖維化。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R575

【參考文獻(xiàn)】

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