【摘要】：背景認知功能障礙(cognitive impairment,CI)是指認知功能受到不同程度損害的狀態(tài),重者如各種類型癡呆,輕者如輕度認知功能障礙等。認知功能障礙在中醫(yī)文獻中沒有專門記載,依據(jù)其臨床表現(xiàn),如記憶力下降等,可歸屬于中醫(yī)學"健忘""善忘" "腦髓消""癡呆""呆病" "文癡"等病癥范疇。癡呆病位在腦,正氣虧虛為本,毒邪內(nèi)停為標,其基本病機是本虛標實、虛實夾雜。治療上以中醫(yī)未病先防,既病防變的觀點為指導,采用了扶正解毒的治則治法,應用了具有益氣養(yǎng)血、滋陰清熱功效的中藥復方參知健腦方(SZJ)。缺氧時,線粒體呼吸鏈電子傳遞及氧化磷酸化發(fā)生障礙,進而導致電子傳遞鏈上酶活性抑制、氧化磷酸化水平降低,ATP合成減少、自由基產(chǎn)生增多等多種途徑損害細胞,致突觸減少,神經(jīng)傳導速度下降,神經(jīng)元壞死或凋亡而出現(xiàn)臨床認知功能下降表現(xiàn)。前期實驗研究發(fā)現(xiàn)SZJ組分可明顯改善A β所誘導的人神經(jīng)母細胞瘤細胞株的神經(jīng)毒性,并能有效改善AD大鼠模型的行為學。本研究將在既往研究基礎上通過缺氧建立認知功能障礙大鼠模型,觀察SZJ對缺氧致認知功能障礙模型大鼠學習記憶能力、β-淀粉樣前體蛋白(βAPP)的含量、β-淀粉樣蛋白(Aβ1-42)的含量以及8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)為標記物檢測線粒體DNA損傷。初步探討參知健腦方對大鼠腦線粒體損傷的保護作用機制,以及腦線粒體損傷與臟腑組織線粒體損傷之間的相關性,進而從中醫(yī)的五臟整體觀的角度闡釋氣虛對人體學習記憶能力的影響,并為其提供理論依據(jù)。最終為參知健腦方對認知功能障礙的預防及治療提供實驗依據(jù)。目的運用分子生物學的方法從線粒體角度觀察參知健腦方對缺氧致認知功能障礙大鼠線粒體損傷的預防及保護機制。探討缺氧時相關臟腑線粒體損傷與腦線粒體損傷的相關性,以及SZJ對其的保護和預防機制。從中醫(yī)的五臟整體觀的角度闡釋氣虛對人體學習記憶能力的影響,并為其提供理論依據(jù),為參知健腦方的臨床應用提供實驗依據(jù)。內(nèi)容與方法將老年大鼠分組,除正常組(A組)外按照實驗要求給予缺氧處理,建立缺氧致線粒體損傷的認知功能障礙模型組(B組)以及參知健腦方干預組(C組),造模為期八周,第八周時利用Morris水迷宮對大鼠的學習記憶能力進行檢測。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測大鼠腦及相關臟腑線粒體內(nèi)β-淀粉樣前體蛋白(βAPP)、β-淀粉樣蛋白(Aβ1-42)的含量,采用大鼠8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)為標記物檢測線粒體DNA的損傷。結果實驗一,結果顯示,各組大鼠逃避潛伏期的比較,第一天,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預組比較有顯著性差異(P0.05),模型組與干預組比較有顯著性差異(P0.05)。第二天,正常組與模型組比較有顯著性差異(P0.05),正常組與干預組比較無顯著性差異,模型組與干預組比較有極顯著性差異。第三天,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預組比較有顯著性差異(P0.05),模型組與干預組比較有極顯著性差異(P0.01)。第四天,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預組比較無明顯差異,模型組與干預組比較有極顯著性差異(P0.01)。結果顯示,各組大鼠定位航行實驗總路程的比較,第一天,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預組比較無明顯差異,模型組與干預組比較有極顯著性差異(P0.01)。第二天,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預組比較有極顯著性差異(P0.01),模型組與干預組比較有極顯著性差異(P0.01)。第三天,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預組比較有極顯著性差異(P0.01),模型組與干預組比較有極顯著性差異(P0.01)。第四天,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預組比較有顯著性差異(P0.05),模型組與干預組比較有極顯著性差異(P0.01)。結果顯示,空間探索原平臺象限游泳時間/總時間中,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預組比較無顯著差異,模型組與干預組比較有極顯著性差異(P0.01)。結果顯示,空間探索穿越目標平臺次數(shù),正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預組比較無顯著差異,模型組與干預組比較有極顯著性差異(P0.01)。實驗二,結果顯示持續(xù)低壓缺氧造模腦組織中APP含量濃度/腦組織蛋白濃度,模型組與正常組、SZJ干預組間均差異顯著(P0.05)。結果顯示持續(xù)低壓缺氧造模腦組織中Aβ1-42含量濃度/腦組織蛋白濃度比較,模型組與正常組、SZJ干預組間均差異顯著(P0.05)。結果顯示持續(xù)低壓缺氧造模腦組織中8-OHdG含量濃度/腦組織蛋白濃度模型組與正常組、SZJ干預組間比較有明顯差異(P0.01),SZJ干預組與正常組間比較差異明顯(P0.05)。結果顯示持續(xù)低壓缺氧造模腦組織中C0X含量濃度/腦組織蛋白濃度模型組與正常組有顯著差異(P0.01),與SZJ干預組間有比較明顯的差異(P0.05),SZJ干預組與正常組間比較無明顯差異。實驗三,持續(xù)低壓缺氧造模八周后腎臟組織中線粒體DNA氧化損傷的檢測正常組與模型組組間差異顯著(P0.05),正常組與干預組組間無明顯差異,模型組與干預組組間比較組間有明顯差異(P0.05)。持續(xù)低壓缺氧大鼠腎組織中COX含量濃度/腎組織蛋白濃度值比較造模八周后正常組與模型組組間差異顯著(P0.05),正常組與干預組組間無明顯差異(P0.05),模型組與干預組組間比較組間有明顯差異(P0.05)。持續(xù)低壓缺氧大鼠脾臟組織中線粒體DNA氧化損傷產(chǎn)物8-OHdG的檢測正常組與模型組之間比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預組比較有極顯著性差異(P0.01),模型組與干預組比較有顯著性差異(P0.05)。脾臟組織中COX活性的表達,正常組與模型組比較有極顯著性差異(P0.01),正常組與干預組比較無明顯差異,模型組與干預組比較有極顯著性差異(P0.01)。結果顯示,持續(xù)低壓缺氧大鼠心臟組織中線粒體DNA氧化損傷產(chǎn)物8-OHdG的檢測正常組與模型組之間比較有顯著性差異(P0.05),正常組與干預組比較無顯著差異,模型組與干預組比較有顯著性差異(P0.05)。心臟組織中COX活性的表達,正常組與模型組比較無顯著性差異,正常組與干預組比較無明顯差異,模型組與干預組比較無顯著性差異。持續(xù)低壓缺氧大鼠肝臟組織線粒體中COX活性的表達,正常組與模型組比較無顯著性差異,正常組與干預組比較無明顯差異,模型組與干預組比較無顯著性差異。結論缺氧致認知功能障礙大鼠動物模型的建立成功。參知健腦方可以抑制APP、Aβ1-42在大鼠腦部的積累和DNA氧化損傷,保護腦線粒體進而發(fā)揮神經(jīng)保護作用,進一步改善缺氧對認知功能障礙學習記憶能力的影響,為參知健腦方的臨床應用提供實驗支持。缺氧致Aβ1-42產(chǎn)生增多刺激神經(jīng)細胞,大量Ca2+內(nèi)流超載,線粒體腫脹功能紊亂,造成mtDNA缺失或突變,故缺氧致8-OHdG產(chǎn)量增多,即氧化損傷產(chǎn)物增多。缺氧造模時參知健腦方對線粒體有一定保護的作用,并對于缺氧造成的氧化損傷及COX酶的活性具有一定的保護作用,大鼠的空間記憶能力較模型組還是有一定改善,根據(jù)均數(shù)加減標準差可知,缺氧產(chǎn)生的8-OHdG越多對大鼠的認知功能影響越大。缺氧時相關臟腑線粒體損傷與腦線粒體損傷的具有一定的相關性,基本呈現(xiàn)正相關的趨勢,為中醫(yī)癡呆中腦與五臟整體觀提供了依據(jù)。
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【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2490222