【摘要】：淋巴瘤是一種血液系統(tǒng)性惡性腫瘤,其中非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma,NHL)約占90%[1-3]。NHL分為B細(xì)胞和T細(xì)胞兩種類型,其中B細(xì)胞型NHL發(fā)病率在80%以上。B細(xì)胞型NHL中最為常見(jiàn)的是彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B-celllymphoma,DLBCL),DLBCL屬侵襲性淋巴瘤,迫切需要臨床治療上的突破[4-5]。魚(yú)腥草(Houttuynia cordata Thunb.)屬三白草科植物,其味辛,性微寒,主要用于治療肺癰吐膿、熱痢熱淋、痛腫瘡毒等證狀。魚(yú)腥草主要成分為揮發(fā)油部分[6]。魚(yú)腥草揮發(fā)油(volatile oil from Houttuynia cordata Thunb Herba,HHO)對(duì)肺炎、慢性宮頸炎等均有較好的療效,對(duì)急性結(jié)膜炎也有一定療效[7-8]。因此,有關(guān)HHO藥理作用的研究成為了熱點(diǎn)。前期實(shí)驗(yàn)表明,HHO能顯著抑制彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤SUDHL-4細(xì)胞生長(zhǎng)增殖。故本文從HHO的體外抗非霍奇金淋巴瘤作用,體內(nèi)藥效學(xué)研究以及其固體脂質(zhì)納米粒的制備三個(gè)方面來(lái)對(duì)HHO進(jìn)行研究,為魚(yú)腥草作為一種新的抗腫瘤中藥的研究提供科學(xué)依據(jù)。1.HHO體外誘導(dǎo)SUDHL-4細(xì)胞凋亡研究采用CCK-8法檢測(cè)HHO作用后細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率,FITC-Annerxin V/PI雙染法和PI單染法分別檢測(cè)HHO作用后細(xì)胞凋亡率和周期變化,光學(xué)顯微鏡和熒光顯微鏡下觀察HHO作用后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化和凋亡狀態(tài),最后通過(guò)磷酸化抗體芯片來(lái)研究HHO誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡通路。CCK-8法結(jié)果表明,HHO對(duì)SUDHL-4細(xì)胞有明顯的抑制作用且有時(shí)間和濃度依賴性。24h的抑制率最高達(dá)77.55%,IC50為0.3198μL/mL;作用48h的抑制率最高達(dá)84.35%,IC50為0.2329μL/mL;作用72h的抑制率最高達(dá)90.94%,IC50為0.2001μL/mL,各組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。用濃度分別為0.10、0.15、0.20、0.25、0.30μL/mL的HHO誘導(dǎo)淋巴瘤細(xì)胞SUDHL-4,48h后細(xì)胞凋亡率可分別達(dá)到(5.95±1.35)%、(13.12±0.28)%、(27.15±0.55)%、(36.35±0.93)%、(76.68±1.01)%、(96.37±0.87)%。周期結(jié)果表明hho能將sudhl-4細(xì)胞阻滯于g2/m期,推測(cè)hho抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制可能與阻礙g2/m期dna和蛋白質(zhì)的合成有關(guān)。不同濃度的hho作用于sudhl-4細(xì)胞48h后,在光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化,且細(xì)胞數(shù)目變少,具有濃度依賴性;熒光顯微鏡下觀察,碎片狀的紅綠色細(xì)胞和胞膜破壞的橙紅色細(xì)胞隨著濃度的增大越來(lái)越多,說(shuō)明凋亡和壞死細(xì)胞逐漸增多,hho可以促進(jìn)淋巴瘤細(xì)胞sudhl-4的凋亡。運(yùn)用磷酸化蛋白芯片技術(shù),用csp100芯片識(shí)別多條信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白的抗體,得到給藥組和空白組的差異,通過(guò)選擇樣本間差異磷酸化位點(diǎn)和其調(diào)變倍數(shù),映射到hho促進(jìn)淋巴瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵蛋白bcl-2和關(guān)鍵分支信號(hào)通路為raf mek1/2 erk1/2 bcl-2,為hho的抗淋巴瘤方面的機(jī)制研究提供了有效的科學(xué)依據(jù)。2.hho體內(nèi)藥效學(xué)研究建立sudhl-4淋巴瘤荷瘤腫瘤模型,將小鼠隨機(jī)分為5組:陽(yáng)性對(duì)照長(zhǎng)春新堿1mg/kg組、hho230mg/kg、150mg/kg、hho70mg/kg組及陰性對(duì)照組。治療期間每天測(cè)量瘤體大小,。治療結(jié)束后將腫瘤及組織剝離,稱量瘤重并計(jì)算抑瘤率,并對(duì)腫瘤及組織進(jìn)行he染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果表明,hho對(duì)于淋巴瘤有明顯抑制作用,且具有濃度依賴性。隨著hho濃度的增加,藥物對(duì)淋巴瘤的抑制率也不斷增加,最高可達(dá)到51.82%。腫瘤切片表明,與陰性組比較,腫瘤細(xì)胞隨著濃度的增加,細(xì)胞間隙越來(lái)越大,結(jié)構(gòu)輪廓越來(lái)越模糊,周圍結(jié)締組織生長(zhǎng),說(shuō)明hho對(duì)于淋巴瘤有生長(zhǎng)抑制作用且長(zhǎng)春新堿組對(duì)于淋巴瘤有明顯的抑制作用。小鼠內(nèi)臟切片表明,低濃度時(shí)給藥時(shí),小鼠的肝臟出現(xiàn)病理變化,而高濃度給藥時(shí),肝臟和脾臟都出現(xiàn)了不同程度的病理變化,說(shuō)明hho經(jīng)腹腔注射給藥時(shí)對(duì)小鼠的肝臟和脾臟有損傷。3.制備魚(yú)腥草揮發(fā)油-固體脂質(zhì)納米粒采用熔融超聲乳化法制備魚(yú)腥草揮發(fā)油固體脂質(zhì)納米粒(volatileoilfromhouttuyniaeherba-solidlipidnanopartcles,hho-sln),經(jīng)過(guò)單因素考察,正交試驗(yàn)來(lái)篩選最佳制備工藝和最優(yōu)處方,并從外觀形狀、粒徑電位分布、包封率、載藥量和穩(wěn)定性等方面對(duì)hho-sln進(jìn)行制劑學(xué)評(píng)價(jià)。最終優(yōu)化制備工藝處方為:單硬脂酸甘油酯用量為0.25%,復(fù)合乳化劑用量為3%,泊洛沙姆和蛋黃卵磷脂的用量比例為3:1,用藥量為1%,吐溫80用量為0.5%。恒溫磁力攪拌下緩慢地將水相加入相同溫度的油相中,均勻攪拌20min后制成初乳,將初乳超聲分散15min,振幅100%,室溫自然冷卻后用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾,濾液即為HHO-SLN。制得的HHO-SLN呈規(guī)則圓球形,粒徑較小,分布均勻,平均粒徑為(42.89±2.13)nm,粒徑在10nm-100nm之間的納米�？偭空既考{米粒的比例為91.8%,平均Zeta電位為(-20.4±0.78)mv,體系比較穩(wěn)定均一。包封率載藥量分別為(91.49±2.40)%、(6.08±0.42)%。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明,高溫強(qiáng)光照都會(huì)影響制劑的穩(wěn)定性,使粒徑增大,包封率降低。初步穩(wěn)定性試驗(yàn)表明,HHO-SLN應(yīng)該避光密封保存在4℃條件下,才能保持制劑外觀一直澄澈透明無(wú)雜物。本文研究表明,HHO在體內(nèi)外均可以誘導(dǎo)大B彌散性淋巴瘤SUDHL-4細(xì)胞的凋亡,且與中藥提取物長(zhǎng)春新堿相比,毒性較小。將HHO制備成HHO-SLN實(shí)現(xiàn)了液體藥物固態(tài)化,并且提高了藥物的穩(wěn)定性和生物利用度,制備出的HHO-SLN制劑學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,具有生產(chǎn)實(shí)用性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R283.6

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本文編號(hào)：2357846