發(fā)布時間：2018-10-31 11:13

【摘要】：研究背景與目的:肺纖維化是一種長期的、漸進性的、致死性的肺病。是由多種原因引起的肺泡炎癥,肺泡持續(xù)性損傷并過度修復,致使肺間質(zhì)纖維過度沉積形成局域性的瘢痕組織。這種過程是不可逆的并且進展迅速,可由環(huán)境粉塵、藥物等致病,尚有一些自發(fā)性肺纖維化患者發(fā)病機制不明確。肺纖維化的治療手段有限,除肺移植外沒有根治的方法。從確診到死亡的生存中位數(shù)僅僅3-5年。作為孤兒藥物的吡非尼酮是唯一在說明書上標明肺纖維化適應(yīng)癥的藥品。但吡非尼酮存在較多的消化系統(tǒng)和神經(jīng)精神系統(tǒng)的不良反應(yīng)使其臨床使用受限。目前缺少肺纖維化治療藥物從另一方面說明其藥物作用靶點尚未發(fā)現(xiàn),因此,發(fā)現(xiàn)療效更好,安全性更高的肺纖維化治療藥物和可能的藥物治療靶點一直以來是藥學科研人員的努力方向之一。肺纖維化以咳嗽咯痰,后期出現(xiàn)進行性加重的呼吸困難等為主要臨床表現(xiàn),同時又具有慢性經(jīng)過或反復發(fā)作等特點,故中醫(yī)學將其列入"肺痿"、"肺痹"等病癥中�，F(xiàn)代中醫(yī)通過長期研究認為:痰熱血瘀,阻滯肺絡(luò),致肺失清肅,氣機閉塞為肺纖維化的主要病機。臨床治療采用清熱解毒、活血化瘀等法治療對肺纖維化有一定的預(yù)防和治療作用。中藥虎杖有著悠久的藥用歷史,《藥性論》、《本草拾遺》等中藥學經(jīng)典著作中都有其在藥學應(yīng)用方面的記載。虎杖,為寥科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根和根莖。味微苦,性微寒。歸肝、膽、肺經(jīng)。具有利濕退黃,清熱解毒,散瘀止痛,止咳化痰的功效�，F(xiàn)代研究顯示虎杖具有抗肺纖維化作用�；⒄溶帐腔⒄劝l(fā)揮抗肺纖維化作用的主要成分之一。為進一步明確虎杖苷抗肺纖維化的作用以及探討其可能的作用機制,發(fā)現(xiàn)潛在的藥物作用靶點,本實驗復制博來霉素誘導肺纖維化的小鼠模型,從動物整體水平觀察虎杖苷的治療作用,觀察其對肺組織轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factors,TGF-β)的干預(yù)作用,從而為虎杖苷治療肺纖維化的應(yīng)用提供更多的證據(jù)。方法:1.復制博來霉素誘導肺纖維化的小鼠模型對比氣管內(nèi)滴注和腹腔注射博來霉素(B1eomycin,BLM)兩種制備肺纖維化模型的優(yōu)劣,確定最佳造模方式。健康雄性C57BL/6小鼠,7周齡,常規(guī)飼養(yǎng)7天,按體重隨機分成11組,每組5只。氣管內(nèi)滴注給藥方式6組,分別為3天組、7天組、14天組、21天組、28天組和空白對照組,氣管內(nèi)滴注博來霉素生理鹽水溶液,劑量相當于博來霉素效價2 mg/kg體重,以實驗開始之日為第0天,于給藥后第3天、第7天、第14天、第21天、第28天摘眼球采血后處死動物,收集血清、肺泡灌洗液、全部肺組織�？瞻捉M同法滴注等體積生理鹽水。腹腔注射給藥方式5組,即7天組、14天組、21天組、28天組和空白對照組。以實驗開始之日為第0天,腹腔注射0.1 mg/mL博來霉素生理鹽水溶液,劑量相當于博來霉素效價1.5 mg/kg體重。隔天一次,持續(xù)兩周,共計8次,7天組共注射4次。分別于第7天、第14天、第21天、第28天處死動物,摘眼球采血后處死動物,收集血清、肺泡灌洗液、全部肺組織�？瞻讓φ战M腹腔注射等體積生理鹽水。以肺組織病理學特征確定最佳造模條件。2.虎杖苷抗肺纖維化的作用根據(jù)上一步實驗結(jié)論,采用氣管內(nèi)滴注博來霉素生理鹽水的方法復制小鼠肺纖維化模型。健康雄性C57BL/6小鼠,7-8周齡,適應(yīng)性飼養(yǎng)7天,按體重隨機分為5組,正常對照組、模型組、陽性藥吡非尼酮組、虎杖苷預(yù)防組、虎杖苷治療組,每組5只。正常對照組氣管內(nèi)滴注滅菌生理鹽水,其他組按2 mg/kg體重劑量氣管內(nèi)滴注無菌博來霉素生理鹽水溶液。.陽性藥對照組、虎杖苷預(yù)防組(171 mg/kg體重)造模后第2天開始灌胃給藥至第28天,虎杖苷治療組(171 mg/kg體重)造模第7天開始灌胃給藥,空白對照組和模型組造模后第2天開始灌胃等體積純水至第28天。以Masson染色法改變程度判斷虎杖苷對肺纖維化的保護作用;以羥脯氨酸含量指示在肺纖維化過程中膠原的變化;肺泡灌洗液中炎性細胞計數(shù)推測肺纖維化過程中炎性反應(yīng)的變化;用小鼠TGF-β蛋白芯片檢測小鼠肺組織中TGF-β1/2/3的含量。結(jié)果:1.Masson染色顯示,博來霉素氣管內(nèi)滴注法在造模后第7d即出現(xiàn)炎性細胞增多,散發(fā)性膠原纖維增多;第14天出現(xiàn)小面積膠原纖維沉積灶;第21天出現(xiàn)多處斑塊狀膠原纖維沉積灶,面積較大;第28天的纖維化程度與第21天接近,略有加重;從第7天致第28天可見明顯的肺纖維化漸進過程、腹腔注射組造模后第7天散發(fā)性出現(xiàn)巨噬細胞、淋巴細胞、中性粒細胞等炎性細胞增多;第14天肺間質(zhì)出現(xiàn)纖維膠原增多跡象;第21天肺間質(zhì)散發(fā)性出現(xiàn)少量膠原纖維增多;第28天與第21天相似,未見斑塊狀膠原纖維沉積灶。2.與空白對照組的肺組織相比,模型對照組的肺組織結(jié)構(gòu)破壞嚴重,呈嚴重肺纖維化病理表現(xiàn)�；⒄溶疹A(yù)防組肺纖維化程度明顯減輕,表現(xiàn)為散發(fā)性小面積膠原纖維沉積。與預(yù)防組相比虎杖苷治療組的肺纖維化改善程度弱于預(yù)防組,纖維化面積大于預(yù)防組,與模型對照組比較具有改善作用。陽性對照藥物吡非尼酮減輕了肺纖維化程度,改善作用與虎杖苷治療組無明顯差別。3.羥脯氨酸含量測定和肺泡灌洗液巨噬細胞計數(shù)結(jié)果均顯示該項結(jié)果與肺纖維化程度無相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論:本實驗表明博來霉素氣管內(nèi)滴注可誘發(fā)明顯的肺纖維化,且與臨床肺纖維化發(fā)病特征相似�；⒄溶漳苊黠@減輕小鼠肺纖維化的程度,對肺纖維化具有潛在的治療作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：中央民族大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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3 陳孟毅;孟愛民;;肺纖維化動物模型及研究進展[J];中國比較醫(yī)學雜志;2016年06期

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本文編號：2301971