【摘要】：板藍根是十字花科植物菘藍的干燥根,具有清熱解毒,涼血利咽之功效,臨床多用于治療各種病毒感染引起的疾病。目前,對于板藍根抗病毒藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制研究有了一定進展,但仍沒有發(fā)現(xiàn)確切的抗病毒藥效成分。研究中的問題集中體現(xiàn)在:(1)體外研究較多,體內(nèi)研究較少。(2)化學(xué)成分研究較多,但抗病毒相關(guān)活性篩選不夠全面。(3)單純抗病毒研究較多,但整體調(diào)控作用研究較少。本課題針對以上三個問題展開相關(guān)研究,為板藍根藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的發(fā)現(xiàn)和抗病毒藥理作用機制的闡明奠定基礎(chǔ)。(1)板藍根血清藥物化學(xué)研究。利用HPLC法對血漿樣品的前處理和色譜條件進行了全面考察,建立了板藍根水提液含藥血漿的指紋圖譜,板藍根水提液含藥血漿樣品與空白血漿樣品圖譜對照,初步確定了板藍根灌胃給藥后的含藥血漿中主要含有10個移行成分。采用LC-MS技術(shù)分析了板藍根水提液、空白血漿、含藥血漿中的化學(xué)成分,最終在板藍根水提液中鑒定出59個化學(xué)成分;含藥血漿圖譜以空白血漿圖譜為背景進行扣除背景處理,并以板藍根水提液中檢測到的59個化學(xué)成分為數(shù)據(jù)庫,運用XIC Manager功能對扣除背景后的含藥血漿圖譜進行蹄查和鑒定,發(fā)現(xiàn)了20種入血成分,根據(jù)二級質(zhì)譜裂解規(guī)律和相關(guān)文獻報道,鑒定出了其中12個化學(xué)成分,并對4(3H)喹唑酮、色胺酮、異牡荊素、表告依春4個成分同標(biāo)準(zhǔn)品進行比對,進一步確認(rèn)了化學(xué)結(jié)構(gòu)。(2)板藍根潛在藥效成分抑制神經(jīng)氨酸酶(NA)、血凝素(HA)的直接抗病毒作用研究。利用計算機分子對接技術(shù)對已從板藍根分離得到的化學(xué)成分進行了全面篩選,得到28個對神經(jīng)氨酸酶可能有抑制活性的化學(xué)成分,3個對血凝素有抑制作用的化學(xué)成分,其中依靛藍酮、3-(2'羥苯基)-4(3H)-喹唑酮、3-(2'羧基苯基)-4(3H)-喹唑酮、色胺酮在板藍根水提液灌胃后的大鼠血漿中能夠檢測到。采用表面等離子體共振(SPR)技術(shù),成功篩選到了 13種化合物與NA蛋白有相互作用;篩選到靛藍與HA蛋白有相互作用,并得到了其相互作用的動力學(xué)及親和力參數(shù)。采用以4-MUNANA為底物的熒光法,對前期通過分子對接和SPR篩選出的板藍根各潛在藥效成分,進行了抑制流感病毒神經(jīng)氨酸酶的活性驗證,檢測結(jié)果表明,4(3H)-喹唑酮和甘草素具有較好的抑制活性,(+)-丁香樹脂醇、大黃素、靛藍、水楊酸、脫落酸、β-谷甾醇、3-醛基吲哚、吲哚-3-乙腈具有較弱的抑制活性;腺嘌呤、棕櫚酸、對羥基苯甲酸無抑制活性;通過紅細胞凝集實驗證實了靛藍具有抑制HA活性的作用。(3)板藍根潛在藥效成分對維甲酸誘導(dǎo)基因蛋白Ⅰ(RIG-Ⅰ)和Toll樣受體3(TLR3)介導(dǎo)的天然免疫信號通路調(diào)控作用的研究。通過PCR、ELISA、Western Blot等檢測方法研究了板藍根含藥血漿對RSV/ploy(I:C)感染后RAW264.7細胞中RIG-Ⅰ和TLR3介導(dǎo)的抗病毒天然免疫信號通路關(guān)鍵信號分子的影響,結(jié)果表明:當(dāng)細胞被病毒感染時,細胞中RIG-Ⅰ和TLR3信號通路關(guān)鍵信號分子mRNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達水平都發(fā)生上調(diào),從而導(dǎo)致IFN-β的高表達。板藍根的抗病毒機制可能是通過下調(diào)病毒感染所誘導(dǎo)的RIG-Ⅰ和TLR3信號通路關(guān)鍵信號分子的高表達,從而下調(diào)IRF3的磷酸化,最終適度抑制病毒感染誘導(dǎo)的IFN-β的高表達,使IFN-β的表達量維持在一個平衡點,既能起到有效的抗病毒作用,又能減輕炎癥和組織損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284.1;R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2268180