【摘要】：本論文分為五個(gè)部分第一部分:文獻(xiàn)綜述對(duì)中藥復(fù)方配伍的研究思路、研究方法及其實(shí)際應(yīng)用進(jìn)行了綜述,并對(duì)中藥復(fù)方配伍規(guī)律研究進(jìn)行展望;總結(jié)了四妙勇安湯及其組方藥味金銀花、玄參、當(dāng)歸、甘草的化學(xué)成分(部分揮發(fā)性成分),共633個(gè)化合物。共引用文獻(xiàn)188篇。第二部分:四妙勇安湯入血成分研究采用LCMS-IT-TOF法鑒定了四妙勇安湯中14個(gè)入血成分,其中9個(gè)為原型成分,5個(gè)可能是四妙勇安湯在體內(nèi)的代謝成分。通過對(duì)比四妙勇安湯復(fù)方與組方藥味含藥血清總離子流色譜圖,發(fā)現(xiàn)所鑒定的復(fù)方入血成分中化合物2、馬錢苷(4)、當(dāng)藥苷(5)、金絲桃苷(7)和異綠原酸C(11)來自于方中君藥金銀花,哈巴苷(1)、安格洛苷C(10)和哈巴俄苷(13)來自于方中臣藥玄參,甘草素硫酸和葡萄糖醛酸酯結(jié)合物(8)、甘草素-7-O-硫酸-4'-O-葡萄糖醛酸酯(12)、甘草素-4'-O-葡萄糖醛酸酯或其異構(gòu)體(14)和甘草苷(6)來自于方中使藥甘草,綠原酸(3)來自于君藥金銀花和佐藥當(dāng)歸兩個(gè)組方藥味,化合物9未發(fā)現(xiàn)存在于任一組方藥味中。通過對(duì)比四妙勇安湯復(fù)方及其組方藥味體外供試品溶液與四妙勇安湯含藥血清總離子流色譜圖,確認(rèn)哈巴苷(1)、綠原酸(3)、馬錢苷(4)、當(dāng)藥苷(5)、甘草苷(6)、金絲桃苷(7)、安格洛苷C(10)、異綠原酸C(11)和哈巴俄苷(13)為原型入血成分。通過對(duì)比四妙勇安湯復(fù)方含藥血清與組方藥味含藥血清總離子流色譜圖,確認(rèn)化合物2、甘草素硫酸和葡萄糖醛酸酯結(jié)合物(8)、化合物9、甘草素-7-O-硫酸-4'-O-葡萄糖醛酸酯(12)和甘草素-4'-O-葡萄糖醛酸酯或其異構(gòu)體(14)為代謝入血成分。在后續(xù)研究中,可進(jìn)一步考察這些入血成分的生物活性,將有助于更好地闡明四妙勇安湯的體內(nèi)藥效物質(zhì),并可為四妙勇安湯復(fù)方及其組方單味藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的建立提供參考。第三部分:基于血清原型成分的復(fù)方煎煮配伍研究采用UPLC-MSn法建立了四妙勇安湯水煎液中9種入血成分(哈巴苷、綠原酸、當(dāng)藥苷、馬錢苷、甘草苷、金絲桃苷、異綠原酸C、安格洛苷C、哈巴俄苷)的含量測(cè)定方法。采用負(fù)離子檢測(cè)模式,分別以哈巴苷(m/z 183.06)、綠原酸(m/z 191.04)、當(dāng)藥苷(m/z 125.00)、馬錢苷(m/z227.03)、甘草苷(m/z 135.02)、金絲桃苷(m/z300.07)、異綠原酸C(m/z353.11)、安格洛苷C(m/z175.05)、哈巴俄苷(m/z345.13)為定量離子,其回歸方程分別為:Y= 13.6102 X+ 1555.7450(r = 0.9995)、Y = 85.9195 X +74658.0895(r = 0.9994)、Y= 6.7546X+401.3286(r = 0.9998)、Y= 27.4063X+89.7270(r = 0.9990)、Y= 570.4144X+4628.2593(r= 1.0000)、Y=356.9293X-825.7706(r =0.9996)、Y=93.8354X+7178.6005(r= 0.9993)、Y=218.7902X+4923.2821(r = 0.9992)、Y= 135.1618X-130.4727(r= 1.0000),各成分分別在 139.156～10095.587、683.126～24962.377、56.881～4126.646、10.019～726.861、54.441～3949.616、4.190～304.014、115.297～8364.659、37.065～1354.404、10.816～784.711 μg·g-1 范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系,其含量分別為 0.1977%、0.8555%、0.1317%、0.0355%、0.1496%、0.0035%、0.1655%、0.0524%、0.0440%(n = 6),平均回收率在 84.125%～113.376%之間,RSD 在 2.211%～10.265%之間,且方法精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性良好。測(cè)定了四妙勇安湯及其不同拆方組合中上述9種入血成分的提取率。發(fā)現(xiàn)兩藥配伍均能提高金銀花中綠原酸的提取率(8.53%～12.00%),三藥配伍均降低綠原酸的提取率(8.99%～13.74%),而復(fù)方中綠原酸的提取率較單味藥和兩藥配伍時(shí)明顯降低(8.97%～12.44%),較三藥配伍時(shí)有所提高(8.55%～13.30%)。兩藥配伍和三藥配伍均降低了金銀花中異綠原酸C的提取率(2.09%～66.48%),復(fù)方中異綠原酸C的提取率較單味藥和任意配伍時(shí)都有所提高(22.75%～87.14%)。配伍當(dāng)歸后提高了金銀花中當(dāng)藥苷的提取率(1.27%),其他配伍組合均降低了當(dāng)藥苷的提取率(10.24%～37.76%)。不同配伍組合均降低了金銀花中馬錢苷的提取率(41.30%～90.78%),金銀花配伍當(dāng)歸或甘草均明顯提高金絲桃苷的提取率(9.68%、13.38%),金銀花、當(dāng)歸和甘草三藥配伍后,金絲桃苷的提取率較單味藥有所提高(2.44%)。復(fù)方中金絲桃苷的提取率明顯低于任意配伍組合后金絲桃苷的提取率(2.62%～18.59%)。不同配伍組合均可降低玄參中哈巴苷的提取率(9.82%～99.78%),復(fù)方中哈巴苷的提取率最低(49.40%)。不同配伍組合均可降低玄參中安格洛苷C的提取率(22.76%～42.87%),三藥配伍組合對(duì)于安格洛苷C提取率的降低作用明顯高于兩藥配伍組合對(duì)于安格洛苷C提取率的降低作用。不同配伍組合均可降低玄參中哈巴俄苷的提取率(7.46%～83.74%),兩藥配伍組合對(duì)于哈巴俄苷提取率的降低作用明顯高于三藥配伍組合對(duì)于哈巴俄苷提取率的降低作用。不同配伍組合均可降低甘草中甘草苷的提取率(51.02%～93.03%),其中甘草配伍金銀花和玄參后甘草苷的提取率最低,三藥配伍組合對(duì)甘草苷提取率的抑制作用稍高于兩藥配伍組合對(duì)甘草苷的抑制作用。第四部分:基于血清原型成分在體腸吸收的配伍研究采用UPLC-MSn法建立了四妙勇安湯水煎液中9種入血成分(哈巴苷、綠原酸、當(dāng)藥苷、馬錢苷、甘草苷、金絲桃苷、異綠原酸C、安格洛苷C、哈巴俄苷)的在體腸吸收含量測(cè)定方法。采用負(fù)離子檢測(cè)模式,分別以哈巴苷(m/z 183.11)、綠原酸(m/z 191.05)、當(dāng)藥苷(m/z 125.07)、馬錢苷(m/z227.12)、甘草苷(m/z255.13)、金絲桃苷(m/z 300.20)、異綠原酸 C(m/z 353.18)、安格洛苷 C(m/z 175.05)、哈巴俄苷(m/z 147.03)為定量離子,各成分回歸方程分別為:Y= 13.4291 X+ 1855.7552(r= 0.9993)、Y=91.4800 X+ 50080.5633(r = 0.9992)、Y= 6.9746 X+ 180.1241(r = 0.9999)、Y= 30.1934 X-184.5150(r = 0.9995)、Y=568.2259X+5623.1312(r= 1.0000)、Y=351.2752X-489.7681(r = 0.9998)、Y=94.0494X+8443.4213(r=0.9996)、Y=220.0985X+5120.6526(r =0.9991)、Y= 134.0560X+36.0185(r= 1.0000),分別在 138.857～10073.892、681.647～24908.336、56.758～4117.722、9.954～722.159、54.375～3944.814、4.181～303.358、115.047～8346.553、36.985～1351.469、10.793～783.013 μg·g-1 范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系,低劑量含量分別為 0.2162%、0.9211%、0.1357%、0.0261%、0.1550%、0.0036%、0.1504%、0.0518%、0.0456%(n = 6);中劑量含量分別為 0.1971%、0.8676%、0.1285%、0.0228%、0.1497%、0.0036%、0.1756%、0.0582%、0.0444%(n = 6);高劑量含量分別為 0.1968%、0.8895%、0.1318%、0.0223%、0.1485%、0.0036%、0.1883%、0.0596%、0.0441%(n =6),低劑量回收率在83.834%～112.324%之間,RSD在4.850%～14.141%之間;中劑量回收率在84.524%～117.079%之間,RSD在1.639%～13.814%之間;高劑量回收率在85.176%～119.501%之間,RSD在2.102%～7.149%之間,且方法精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性良好。比較了 9種入血成分在十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸藥物吸收速率常數(shù)(Ka)和藥物表觀吸收系數(shù)(Papp)的差異,確定了十二指腸和回腸兩個(gè)考察腸段。十二指腸:復(fù)方中綠原酸的腸吸收參數(shù)高于單味金銀花和任一配伍組合。當(dāng)歸與金銀花為伍的任一配伍組合都會(huì)提高綠原酸在十二指腸段的吸收,但甘草與金銀花配伍后會(huì)影響綠原酸在十二指腸段的吸收。不同配伍組合當(dāng)藥苷與馬錢苷的腸吸收參數(shù)Ka、Papp值在復(fù)方和單味金銀花中較高,但其統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果并不具有顯著性差異。不同配伍組合金絲桃苷的腸吸收參數(shù)Ka、Papp值在金銀花與甘草配伍組合時(shí)最高,其統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果具有顯著性差異(P0.01)。異綠原酸C在單味金銀花和復(fù)方中腸吸收參數(shù)較高,其統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果具有顯著性差異(P0.05),在金銀花、玄參、甘草三藥配伍時(shí)腸吸收情況最好,其統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果具有顯著性差異(P0.01)。復(fù)方和金銀花、玄參、甘草三藥配伍組合哈巴苷的腸吸收參數(shù)Ka、Papp值明顯高于單味藥和其他配伍組合哈巴苷的腸吸收參數(shù)值,統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果具有顯著性差異(P0.01)。不同配伍組合安格洛苷C的腸吸收參數(shù)均明顯高于單味玄參中安格洛苷C的腸吸收參數(shù),且統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果具有顯著性差異(P0.05)。其中復(fù)方中安格洛苷C的腸吸收參數(shù)值最高,但復(fù)方與其他配伍組合相比較并不具有顯著性差異。不同配伍組合哈巴俄苷的腸吸收參數(shù)Ka、Papp值以復(fù)方最高,單味玄參最低,但其兩兩比較并不具有顯著性差異。甘草與當(dāng)歸配伍后甘草苷的腸吸收情況最好,其統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果具有顯著性差異(P0.05)�；啬c:復(fù)方中綠原酸的腸吸收參數(shù)高于單味金銀花和任一配伍組合。當(dāng)歸與金銀花為伍的任一配伍組合都會(huì)提高綠原酸在回腸段的吸收,但甘草與金銀花配伍后會(huì)影響綠原酸在回腸段的吸收。不同配伍組合當(dāng)藥苷與馬錢苷的腸吸收參數(shù)Ka、Papp值在復(fù)方和單味金銀花中都處于較低水平。不同配伍組合金絲桃苷的腸吸收參數(shù)Ka、Papp值在金銀花與甘草配伍組合后都有所降低,金銀花、玄參、當(dāng)歸三藥配伍時(shí)金絲桃苷的吸收處于最高水平。復(fù)方中金絲桃苷的吸收參數(shù)值未見高于所有拆方配伍組合。異綠原酸C在復(fù)方中腸吸收參數(shù)最高,但其統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果不具有顯著性差異。玄參中三個(gè)指標(biāo)成分哈巴苷、安格洛苷C、哈巴俄苷的腸吸收參數(shù)均在金銀花、玄參、當(dāng)歸三藥配伍時(shí)最高,在單味玄參中呈現(xiàn)較高的腸吸收水平,但在復(fù)方中三個(gè)指標(biāo)成分的腸吸收參數(shù)值都較低,其中安格洛苷C與哈巴俄苷在復(fù)方中腸吸收參數(shù)值最低。單味甘草中甘草苷的回腸吸收參數(shù)最高,復(fù)方中甘草苷的吸收處于不同配伍的中等水平。第五部分:基于血清原型成分藥代動(dòng)力學(xué)的配伍研究采用UPLC-MSn法建立了四妙勇安湯水煎液中7種入血成分(哈巴苷、綠原酸、當(dāng)藥苷、馬錢苷、甘草苷、安格洛苷C、哈巴俄苷)的血漿樣品含量測(cè)定方法。采用負(fù)離子檢測(cè)模式,以蒙花昔為內(nèi)標(biāo),分別以哈巴苷(m/z 183.11)、綠原酸(m/z 191.05)、當(dāng)藥苷(m/z 125.07)、馬錢苷(m/z 227.12)、甘草苷(m/z 255.13)、安格洛苷 C(m/z 175.05)、哈巴俄苷(m/z 147.03)、蒙花苷(m/z 283.15)為定量離子,各成分分別在0.667～1558.660、0.807～1886.321、5.813～13580.340、1.690～3948.969、0.161～1003.754、0.121～2157.445、0.029～580.335 μg·mL-1線性范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系,低劑量基質(zhì)效應(yīng)在80.590%～111.896%之間,RSD在2.420%～9.730%之間;中劑量基質(zhì)效應(yīng)在81.085%～113.569%之間,RSD在1.155%～5.733%之間;高劑量基質(zhì)效應(yīng)在82.892%～105.884%之間,RSD在1.355%～10.577%之間,低劑量提取回收率在84.869%～97.436%之間,RSD在1.044%～13.620%之間;中劑量提取回收率在82.900%～99.485%之間,RSD在3.017%～6.776%之間;高劑量提取回收率在86.785%～98.187%之間,RSD在0.810%～8.572%之間,方法精密度、準(zhǔn)確度良好,方法穩(wěn)定性、短期穩(wěn)定性、長(zhǎng)期穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性良好,符合生物樣品檢測(cè)分析要求。采用所建立的血漿樣品含量測(cè)定方法測(cè)定了不同拆方組合大鼠灌胃給藥后目標(biāo)成分的藥代動(dòng)力學(xué)差異。哈巴苷:復(fù)方中哈巴苷的達(dá)峰時(shí)間(Tmax)明顯延長(zhǎng)(P0.01),且三藥配伍組合后哈巴苷的達(dá)峰時(shí)間(Tmax)均高于兩藥配伍組合后的達(dá)峰時(shí)間(Tmax)(p0.05)。其藥時(shí)曲線下面積AUC在單味玄參中最高,在復(fù)方與其他配伍組合中未見明顯差異。復(fù)方中哈巴苷的平均駐留時(shí)間(MRT)值僅低于玄參與甘草配伍組合,在其他配伍組合中處于較高水平(P0.05)。不同配伍組合后哈巴苷的半衰期(t1/2)未見明顯差異,其藥峰濃度(Cmax)在單味玄參和復(fù)方中都處于較高水平,高于除金銀花、玄參、當(dāng)歸三藥配伍的任一配伍組合(P0.05),且三藥配伍組合的藥峰濃度值(Cmax)均高于兩藥配伍組合。綠原酸:復(fù)方中綠原酸的半衰期(t1/2)和其他配伍組合相比明顯延長(zhǎng)(P0.01)。其藥時(shí)曲線下面積(AUC)在單味金銀花中呈現(xiàn)最高值(P0.01),其他配伍組合中此參數(shù)水平未見明顯差異。其平均駐留時(shí)間(MRT)值在金銀花與玄參配伍后最高,其他配伍組合中此參數(shù)未見明顯差異。復(fù)方配伍后綠原酸的達(dá)峰時(shí)間(Tmax)有所延長(zhǎng),其參數(shù)值高于除金銀花、當(dāng)歸、甘草配伍之外的任一配伍組合(P0.05)。綠原酸的藥峰濃度(Cmax)在單味金銀花中處于最高水平(P0.05),復(fù)方中此參數(shù)值高于除金銀花、玄參配伍之外的任一配伍組合(P0.05)。當(dāng)藥苷:當(dāng)藥苷在復(fù)方中的平均駐留時(shí)間(MRT)和達(dá)峰濃度(Tmax)都明顯高于單味金銀花和其他配伍組合,但其統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果并不具有顯著性差異。其在不同配伍組合中的半衰期(t1/2)變化較為明顯,單味金銀花和復(fù)方中當(dāng)藥苷的半衰期(t1/2)較其他配伍組合顯著縮短(P0.05),且復(fù)方中此參數(shù)值最小。馬錢苷:復(fù)方中馬錢苷的藥時(shí)曲線下面積(AUC)明顯高于其他配伍組合(P0.05),其平均駐留時(shí)間(MRT)明顯高于其他配伍組合(P0.01),其達(dá)峰濃度(Tmax)值有所提高,但其統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果并不具有顯著性差異。馬錢苷在單味金銀花與復(fù)方中的其半衰期(t1/2)和藥峰濃度(Cmax)都較其他配伍組合有所縮短(P0.01)和降低(P0.05)。甘草苷:復(fù)方中甘草苷的半衰期(t1/2)較其他配伍組合明顯延長(zhǎng)(P0.01),其他配伍組合之間此參數(shù)值未見明顯差異。不同配伍組合中甘草苷的平均駐留時(shí)間(MRT)均較單味甘草明顯提高(P0.05),復(fù)方中甘草苷的平均駐留時(shí)間(MRT)值最高,但與其他配伍組合相比較未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。甘草苷的達(dá)峰時(shí)間(Tmax)和藥峰濃度(Cmax)在復(fù)方中都有所降低。安格洛苷C:復(fù)方中安格洛苷C的平均駐留時(shí)間(MRT)最長(zhǎng),但其統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果并不具顯著性差異。復(fù)方中安格洛苷C的藥時(shí)曲線下面積(AUC)較三藥配伍組合明顯提高(P0.05)。不同配伍組合后安格洛苷C的半衰期(t1/2)都較單味玄參顯著延長(zhǎng)(P0.05),但復(fù)方中此參數(shù)值亦處于較低水平。安格洛苷C的達(dá)峰時(shí)間(Tmax)在不同配伍組合中未見明顯差異,但復(fù)方中其藥峰濃度(Cmax)較其他配伍組合明顯提高(P0.05)。哈巴俄苷:不同配伍組合中哈巴俄苷的半衰期(t1/2)變化明顯,復(fù)方中其半衰期(t1/2)值最高,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P0.01),且三藥配伍組合后此參數(shù)值均顯著高于兩藥配伍組合(P0.05)。復(fù)方中哈巴俄苷的藥峰濃度(Cmax)明顯高于其他配伍組合(P0.05),而復(fù)方中其達(dá)峰時(shí)間(Tmax)變化并不明顯。復(fù)方中哈巴俄苷的藥時(shí)曲線下面積(AUC)較除單味玄參以外其他配伍組合明顯提高(P0.01)。創(chuàng)新性首次采用LCMS-IT-TOF法鑒定和歸屬四妙勇安湯及其組方藥味入血成分;首次采用UPLC-MSn法進(jìn)行基于血清原型成分的四妙勇安湯煎煮配伍研究;首次采用UPLC-MSn法進(jìn)行基于血清原型成分在體腸吸收的四妙勇安湯配伍研究;首次采用UPLC-MSn法進(jìn)行基于血清原型成分藥代動(dòng)力學(xué)的四妙勇安湯配伍研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R289.5

【參考文獻(xiàn)】

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9 羅朵生;李坤平;榮向路;郭姣;;田黃方降脂作用配伍機(jī)制的尿液代謝組學(xué)研究[J];中藥藥理與臨床;2016年04期

10 胡少偉;姜艷艷;高堯春;王，

本文編號(hào)：2170422