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絞股藍(lán)總皂苷對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性視神經(jīng)炎視神經(jīng)及視網(wǎng)膜保護(hù)作用的研究

發(fā)布時(shí)間:2018-05-18 03:13

  本文選題:絞股藍(lán)總皂苷 + 視神經(jīng)炎。 參考:《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文


【摘要】:目的誘導(dǎo)C57BL/6小鼠建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)動(dòng)物模型,應(yīng)用絞股藍(lán)總皂苷(Gypenosides,GPs)進(jìn)行干預(yù),觀察小鼠神經(jīng)功能行為改變、視神經(jīng)及視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)改變、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(Retinal Ganglion Cells,RGCs)凋亡情況,探討GPs對(duì)EAE小鼠視神經(jīng)及視網(wǎng)膜的保護(hù)作用。方法應(yīng)用MOG35-55多肽加完全弗氏佐劑皮下注射免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型,實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、EAE模型組、GPs干預(yù)組、甲基強(qiáng)的松龍組(MP組)、GPs與甲基強(qiáng)的松龍聯(lián)合干預(yù)組(COM組)。自免疫后第7天起,GPs干預(yù)組每天給予腹腔內(nèi)注射GPs 30mg/kg,連續(xù)給藥至動(dòng)物處死;MP組每天給予腹腔內(nèi)注射甲基強(qiáng)的松龍20mg/kg,連續(xù)給藥3天;COM組每天給予腹腔內(nèi)注射甲基強(qiáng)的松龍20mg/kg,連續(xù)給藥3天,給予腹腔內(nèi)注射GPs 30mg/kg,連續(xù)給藥至動(dòng)物處死。每天稱量小鼠體重,觀察記錄神經(jīng)功能表現(xiàn)、評(píng)分,于免疫后第7天進(jìn)行視覺(jué)誘發(fā)電位檢查;于免疫后第14天、第20天、第30天、第40天進(jìn)行OCT檢查,于免疫后第20天、第40天取小鼠視神經(jīng)及視網(wǎng)膜組織制成石蠟切片,采用HE染色評(píng)估視神經(jīng)、視網(wǎng)膜炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況,TUNEL法檢測(cè)RGCs凋亡改變。結(jié)果1、發(fā)病時(shí)間、評(píng)分:正常對(duì)照組小鼠未出現(xiàn)癥狀;實(shí)驗(yàn)組小鼠于免疫后一周左右體重稍有下降,后逐漸增長(zhǎng);實(shí)驗(yàn)組小鼠于免疫后第9天起陸續(xù)發(fā)病。EAE組小鼠發(fā)病率為100%,神經(jīng)功能評(píng)分較高,病情最嚴(yán)重;GPs組發(fā)病率為97%,COM組、MP組發(fā)病率均為90%。COM組可推遲發(fā)病時(shí)間,與EAE組相比,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。正常對(duì)照組小鼠評(píng)分均為0分,免疫后第14天,COM組與EAE組相比,癥狀較輕,評(píng)分較低,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在其余各時(shí)間段三組藥物干預(yù)組小鼠癥狀評(píng)分與EAE組相比,總體評(píng)分較低,但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、VEP:正常對(duì)照組、EAE組小鼠免疫后第7天VEP檢查結(jié)果顯示EAE組小鼠的N1波潛伏期、P1波潛伏期、P2波潛伏期均較正常對(duì)照組延長(zhǎng),P1波振幅較正常對(duì)照組下降,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而N2波潛伏期、P2波振幅與正常對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。3、OCT:免疫后第20天,EAE組RNFL與正常對(duì)照組、三個(gè)藥物干預(yù)組相比明顯變薄,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;三個(gè)藥物干預(yù)組之間對(duì)比差異不大,且均與正常對(duì)照組相似厚度,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。免疫后第30天,EAE組RNFL進(jìn)一步變薄,EAE組、MP組RNFL與正常對(duì)照組相比均明顯變薄P0.01,EAE組為甚,正常對(duì)照組、GPs組、COM組相似厚度,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;三個(gè)藥物干預(yù)組均較EAE組厚,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;MP組較GPs組、COM組薄,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫后第40天,EAE組、MP組RNFL進(jìn)一步變薄,GPs組、COM組相似厚度且均與正常對(duì)照組相似厚度,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;GPs組、COM組均較EAE組、MP組為厚,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4、HE染色:正常對(duì)照組小鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)排列整齊,染色均勻,未發(fā)現(xiàn)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn);視神經(jīng)縱切面HE染色均勻,神經(jīng)纖維整齊均勻排列,未觀察到有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象。于小鼠免疫后第20天,EAE組視網(wǎng)膜、視神經(jīng)可見(jiàn)較多數(shù)量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),水腫較明顯,神經(jīng)纖維排列紊亂,大量空泡形成;三個(gè)藥物干預(yù)組炎性浸潤(rùn)程度相似且均較EAE組少見(jiàn),水腫較輕。于小鼠免疫后第40天,各組小鼠視神經(jīng)、視網(wǎng)膜的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)均較前減少,水腫較前減輕,三個(gè)藥物干預(yù)組與EAE組相比,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層水腫較輕,炎性細(xì)胞也較少見(jiàn)。可見(jiàn)EAE組、MP組RGCs較前明顯減少,排列疏松。5、TUNEL染色:正常對(duì)照組小鼠幾乎未觀察到RGCs凋亡;實(shí)驗(yàn)組均可見(jiàn)不同程度的RGCs凋亡,其中以EAE組、MP組最為明顯,且隨著時(shí)間的推移,凋亡細(xì)胞數(shù)目逐漸增多,與正常對(duì)照組相比具有顯著差異。GPs組、COM組凋亡細(xì)胞相對(duì)較少,隨著藥物干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng),存活的RGCs較EAE組多。結(jié)論(1)絞股藍(lán)總皂苷與甲基強(qiáng)的松龍聯(lián)合運(yùn)用可推遲EAE小鼠的發(fā)病;(2)絞股藍(lán)總皂苷單獨(dú)或與甲基強(qiáng)的松龍聯(lián)合運(yùn)用可阻止EAE病變中視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層變薄,對(duì)其起到保護(hù)作用;(3)絞股藍(lán)總皂苷可減輕EAE炎癥反應(yīng);(4)絞股藍(lán)總皂苷可減少EAE視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡,起到神經(jīng)保護(hù)作用。
[Abstract]:Objective To investigate the effects of GPs on optic nerve and retina in C57BL / 6 mice . Compared with the normal control group , there was no significant difference between the two groups . Compared with the normal control group , there was no significant difference between the two groups : the N1 wave latency , the P1 wave latency and the P2 wave latency were significantly lower than those in the normal control group . Compared with normal control group , there were no inflammatory cell infiltration . ( 2 ) The combined use of gypenoside alone or combined with methyl prednisolone can prevent the retinal nerve fiber layer from thinning and protect it ; ( 3 ) the gypenoside can reduce the inflammatory reaction of rats ; and ( 4 ) the gypenoside can reduce the apoptosis of the ganglion cells of the retina and play a role of nerve protection .
【學(xué)位授予單位】:廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號(hào)】:R774.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào):1904107

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