發(fā)布時間：2018-05-04 00:06

  本文選題：腫瘤耐藥 + 5-氟尿嘧啶�。� 參考：《鄭州大學》2017年碩士論文

【摘要】：首先,我們采用濃度遞增法刺激人胃癌細胞MGC803,建立了人胃癌體外耐藥細胞模型MGC803/5-FU,并初步探討了MGC803和MGC803/5-FU的生物學性質(zhì)及耐藥株MGC803/5-FU的耐藥機制。在這部分的研究中,我們以人胃癌細胞MGC803為親本細胞株,以化療藥物5-氟尿嘧啶低濃度持續(xù)刺激,并逐漸加大刺激濃度,建立人胃癌體外耐藥細胞模型MGC803/5-FU。耐藥細胞株建立后,我們采用CCK8法檢測了親本細胞株及耐藥細胞株對5-氟尿嘧啶、順鉑、紫杉醇、阿霉素的耐藥性及耐藥細胞株撤藥6個月內(nèi)的耐藥穩(wěn)定性。同時,5-氟尿嘧啶作用親本細胞與耐藥細胞后,經(jīng)DAPI染色和Annexin V/PI染色進一步驗證耐藥株MGC803/5-FU對5-FU的耐藥性;然后,我們通過PI染色、平板克隆和繪制生長曲線等檢測了MGC803和MGC803/5-FU生物學性質(zhì)的差異。最后,通過Western blot檢測親本細胞和耐藥細胞P-gp、TS、β-catenin等蛋白表達量的差異,分析可能的耐藥機制。經(jīng)過8個月的誘導,成功建立了人胃癌體外耐藥細胞模型MGC803/5-FU,耐藥指數(shù)為13.02,但交叉耐藥現(xiàn)象不明顯;同時,耐藥細胞株撤藥六個月內(nèi)耐藥指數(shù)能夠保持在9到13之間,耐藥穩(wěn)定性較好。5-氟尿嘧啶作用后,相同濃度下,耐藥細胞的凋亡率明顯低于親本細胞。與親本細胞相比,耐藥細胞G0/G1期比例增加,S期比例減少;耐藥細胞生長速度減慢,群體倍增時間增大,克隆形成率降低。耐藥細胞中TS蛋白表達量增加,同時Wnt/β-catenin通路相關(guān)蛋白發(fā)生改變。在耐藥模型的基礎(chǔ)上,我們接著研究了新型甾體聯(lián)苯類化合物ZYL-263對胃癌細胞MGC803及其耐藥細胞MGC803/5-FU的抗腫瘤活性及其機制。我們采用CCK8法和平板克隆法檢測化合物ZYL-263對MGC803及MGC803/5-FU細胞生長增殖的影響。DAPI染色和Annexin V/PI染色檢測ZYL-263對兩株細胞細胞凋亡的影響;同時,DCFH-DA染色檢測ZYL-263對兩株細胞活性氧的影響。最后,ZYL-263作用兩株細胞后,Western blot檢測Bcl-2、Bax、Total-Caspase-7、Cleaved-Caspase-7、Total-PARP-1、Cleaved-PARP-1、TS等蛋白表達量的變化。結(jié)果顯示,ZYL-263對MGC803及MGC803/5-FU有較好的生長抑制作用,同時MGC803/5-FU的IC50低于其對MGC803的的IC50;同時,ZYL-263能夠抑制兩株細胞的克隆形成。ZYL-263能夠使兩株細胞的細胞核發(fā)生皺縮和明顯的凋亡,且MGC803/5-FU的凋亡率高于MGC803的凋亡率。ZYL-263作用兩株細胞后,胞內(nèi)活性氧水平明顯增高。ZYL-263能夠降低兩株細胞內(nèi)的Bcl-2、Total-Caspase-7、Total-PARP-1蛋白表達量,同時增加兩株細胞內(nèi)的Bax、Cleaved-Caspase-7、Cleaved-PARP-1蛋白表達量;另外,ZYL-263顯著下調(diào)耐藥株MGC803/5-FU的TS蛋白表達量,而對MGC803的TS蛋白表達量沒有明顯影響。綜上所述,我們成功建立了穩(wěn)定的人胃癌體外耐藥模型MGC803/5-FU,檢測了其相關(guān)生物學特性及其可能的耐藥機制,為進一步研究耐藥相關(guān)原因及尋找新型抗腫瘤化合物提供了穩(wěn)定的體外模型。新型化合物ZYL-263能夠明顯促進親本細胞MGC803及其耐藥細胞MGC803/5-FU的凋亡,且對MGC803/5-FU的促凋亡作用更明顯,為尋找新型抗腫瘤化合物研究提供一定的思路。
[Abstract]:First, we used the concentration increase method to stimulate human gastric cancer cell MGC803, and established the human gastric cancer cell model MGC803/5-FU, and preliminarily discussed the biological properties of MGC803 and MGC803/5-FU and the resistance mechanism of the drug resistant strain MGC803/5-FU. In this part, we use the human gastric cancer cell MGC803 as the parent cell line and the chemotherapeutic drug. After the low concentration of 5- fluorouracil was sustained and the concentration was gradually increased, the drug resistant cell line of human gastric cancer was established, and the drug resistance of MGC803/5-FU., cisplatin, paclitaxel and amamycin and the withdrawal of drug resistant cell lines were detected by CCK8 method within 6 months. Resistance stability. At the same time, after 5- fluorouracil acted on the parent and drug-resistant cells, the resistance of MGC803/5-FU to 5-FU was further verified by DAPI staining and Annexin V/PI staining. Then, we detected the differences in the biological properties of MGC803 and MGC803/5-FU by PI staining, flat clones and plotting growth curves. Finally, we passed Weste. RN blot detected the difference in the expression of P-gp, TS, and beta -catenin in the parent and drug-resistant cells, and analyzed the possible mechanism of drug resistance. After 8 months of induction, the drug resistance cell model of human gastric carcinoma was successfully established, and the resistance index was 13.02, but the cross resistance was not obvious. At the same time, drug resistant cell lines were withdrawn for six months. At the same concentration, the apoptosis rate of drug resistant cells was significantly lower than that of parental cells at the same concentration of 9 to 13, with the same resistance and stability of.5- fluorouracil. Compared with the parent cells, the proportion of G0/G1 phase increased, the proportion of S phase decreased, the growth rate of drug-resistant cells decreased, the population doubling time increased, and the clone formation rate decreased. The expression of TS protein in the cells increased and the Wnt/ beta -catenin pathway related proteins changed. On the basis of the drug resistance model, we then studied the anti-tumor activity and mechanism of the new steroidal biphenyl compound ZYL-263 on the gastric cancer cell MGC803 and its drug-resistant cell MGC803/5-FU. We used the CCK8 method and the plate cloning method to detect the antitumor activity. The effect of ZYL-263 on the growth and proliferation of MGC803 and MGC803/5-FU cells,.DAPI staining and Annexin V/PI staining were used to detect the effect of ZYL-263 on cell apoptosis of two cells. At the same time, DCFH-DA staining was used to detect the effect of ZYL-263 on the reactive oxygen species of two cells. Finally, ZYL-263 action two cells, Western blot -Caspase-7, Total-PARP-1, Cleaved-PARP-1, TS and other protein expression changes. The results showed that ZYL-263 had better growth inhibition on MGC803 and MGC803/5-FU, while MGC803/5-FU's IC50 was lower than the IC50 on MGC803. At the same time, ZYL-263 could inhibit the formation of two cells, which could cause the cells of two cells to hair wrinkle. Contraction and obvious apoptosis, and MGC803/5-FU apoptosis rate is higher than the apoptosis rate of MGC803.ZYL-263 two cells, the intracellular active oxygen level is obviously increased,.ZYL-263 can reduce the Bcl-2, Total-Caspase-7, Total-PARP-1 protein expression in two cells, and increase the Bax, Cleaved-Caspase-7, Cleaved-PARP-1 protein table in two cells. In addition, ZYL-263 significantly downregulated the TS protein expression of the drug resistant strain MGC803/5-FU, but had no significant influence on the TS protein expression of MGC803. In summary, we successfully established a stable human gastric cancer drug resistance model MGC803/5-FU, which detected its related biological characteristics and its possible mechanism of resistance to further study of drug resistance. The cause and the search for new antitumor compounds provide a stable in vitro model. The new compound, ZYL-263, can obviously promote the apoptosis of the parent cell MGC803 and its drug-resistant MGC803/5-FU cells, and the apoptosis promoting effect on MGC803/5-FU is more obvious, which provides a certain way of thinking for the study of new antitumor compounds.

【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.2

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本文編號：1840680