本文選題：自噬　切入點(diǎn)：中醫(yī)藥　出處：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:研究調(diào)脂顆粒對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC)在細(xì)胞、蛋白質(zhì)、分子水平自噬的影響,從而探討調(diào)脂顆�？箘�(dòng)脈粥硬化的作用機(jī)制。方法:運(yùn)用血清藥理學(xué)方法,以調(diào)脂顆粒含藥血清處理生理狀態(tài)及病理狀態(tài)(過度自噬狀態(tài))下的內(nèi)皮細(xì)胞。通過MTT比色法檢測調(diào)脂顆粒含藥血清對內(nèi)皮細(xì)胞生長的影響。Westernblot檢測內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的相對表達(dá)量變化,免疫熒光法檢測內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)自噬小體的數(shù)目變化,SYBRGreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)基因mTOR、ATG5、ATG7、Beclin-1的相對表達(dá)量變化。結(jié)果:調(diào)脂顆粒含藥血清處理內(nèi)皮細(xì)胞后,較空白組,細(xì)胞活力無明顯改變,自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ的相對表達(dá)上調(diào),LC3自噬小體數(shù)量增加(p0.05),Beclinl在分子及蛋白層面表達(dá)均無明顯差異(p0.05)。雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)處理內(nèi)皮細(xì)胞后,較空白組比較自噬相關(guān)蛋白及相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)。調(diào)脂顆粒含藥血清聯(lián)合雷帕霉素處理HUVEC后,細(xì)胞活力無明顯改變,較雷帕霉素單獨(dú)處理比較,自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ的相對表達(dá)顯著下降,LC3自噬小體數(shù)量明顯減少(p0.05或p0.01),各自噬相關(guān)基因表達(dá)均上調(diào),Beclin-1在分子及蛋白層面表達(dá)均無明顯差異(p0.05)。3MA(6-氨基-3-甲基嘌呤,3-Metllyladenine)聯(lián)合雷帕霉素組與雷帕霉素組在各蛋白及分子水平存在明顯差異(p0.05),但與各濃度調(diào)脂顆粒含藥血清聯(lián)合雷帕霉素處理組無明顯差異(p0.05)。結(jié)論:在蛋白及分子水平層面,調(diào)脂顆粒上調(diào)生理狀態(tài)下內(nèi)皮細(xì)胞自噬,抑制病理狀態(tài)下內(nèi)皮細(xì)胞自噬,驗(yàn)證了調(diào)脂顆�？纱龠M(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞適度自噬,抑制內(nèi)皮細(xì)胞過度自噬,這可能是其抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制之一。各調(diào)脂顆粒藥物組與相關(guān)對照組的LC3表達(dá)存在差異,而Beclinl的表達(dá)無明顯差異,這說明調(diào)脂顆粒通過調(diào)控與LC3合成相關(guān)的信號(hào)通路從而調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞自噬。
[Abstract]:Aim: to study the effect of Tiaozhi granules on autophagy of human umbilical vascular endothelial cells in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) at cell, protein and molecular levels, and to explore the mechanism of Tiaozhi granule in preventing atherosclerosis.Methods: serum pharmacological method was used to treat endothelial cells in physiological and pathological state (hyperautophagy) with Tiaozhi granule.The effect of Tiaozhi granule serum on the growth of endothelial cells was detected by MTT colorimetry. Western blot was used to detect the relative expression of autophagy associated protein LC3- 鈪，

本文編號(hào)：1711768