本文選題：microRNA(miRNA)　切入點：血漿　出處：《南京醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：汞是最早被人類發(fā)現(xiàn)并利用的金屬元素之一,也是唯一一種在常溫、常壓下以液態(tài)形式存在的金屬。汞在工業(yè)上用途十分廣泛,金屬汞常用于溫度計、血壓計、氣壓表、熒光燈等含汞儀器的制造,在水銀溫度計、血壓計生產(chǎn)行業(yè)中,汞是最主要的職業(yè)病危害因素。MicroRNA(miRNA)是一類長度約為20～24個核苷酸的小分子RNA,不具有編碼蛋白質(zhì)的功能,miRNA主要是通過在胞漿中與靶基因3'UTR(3'Untranslated Region)區(qū)域結(jié)合,降解靶基因或抑制靶基因的翻譯進而在調(diào)節(jié)基因表達方面發(fā)揮著重要作用。越來越多的環(huán)境表觀遺傳學研究結(jié)果顯示,人體暴露于鉛、汞、錳等職業(yè)和環(huán)境重金屬會引起miRNA表達譜,DNA甲基化和組蛋白修飾等表觀遺傳學狀態(tài)的改變。近年來,許多研究者發(fā)現(xiàn)血漿或者血清中的miRNA可以作為一種穩(wěn)定的分子標志物用來指示疾病狀態(tài),并且不少miRNA已經(jīng)被用為診斷腫瘤和心血管疾病的分子標志物。因此,在本研究中,我們期望利用miRNA芯片篩選結(jié)合實時熒光定量PCR驗證來識別汞作業(yè)工人血漿中可能和汞暴露有關(guān)的miRNA來作為分子標志物。研究目的:通過miRNA芯片和實時熒光定量PCR技術(shù)篩選并驗證與職業(yè)性汞暴露相關(guān)的血漿miRNA分子,并對驗證成功的miRNA判斷其用于診斷職業(yè)性汞中毒和汞吸收的意義。對象與方法:本研究在篩選階段,利用miRNA微陣列芯片分別在各10例慢性汞中毒工人、汞吸收工人和對照工人的混合血漿池樣本中檢測miRNA的表達情況,根據(jù)篩選標準選擇待驗證的miRNA,然后使用TaqmanmiRNA探針法和實時熒光定量PCR技術(shù)在相同的樣本中檢測待驗證miRNA的表達量。隨后在另外各30例汞中毒工人、汞吸收工人和對照中對于初步驗證成功的miRNA進行擴大樣本驗證。最后應(yīng)用受試者特性工作曲線(ROC曲線)和約登指數(shù)評價驗證的miRNA用于診斷職業(yè)性汞中毒和汞吸收的意義,并借助軟件平臺預測驗證的miRNA的靶基因并進行GO(gene ontology,基因本體)富集分析和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes,京都基因與基因組百科全書)通路分析。結(jié)果:在芯片篩選階段,共有8個miRNA符合篩選標準,其中相較于對照組,hsa-miR-16-5p、hsa-miR-30c-5p、hsa-miR-181a-5p 和 hsa-let-7e-5p 在慢性汞中毒和汞吸收組工人血漿中表達下調(diào),而hsa-miR-92a-3p、hsa-miR-122-5p、hsa-miR-451a和hsa-miR-486-5p則表達上調(diào)。在熒光定量PCR初步驗證階段,慢性汞中毒組和汞吸收組血漿中hsa-miR-92a-3p和hsa-miR-486-5p的表達量相比對照組均顯著上調(diào)(P0.05),且變化趨勢與芯片結(jié)果一致。隨后在擴大樣本驗證階段,慢性汞中毒組和汞吸收組血漿中hsa-miR-92a-3p和hsa-miR-486-5p的表達量與對照組相比仍顯著上調(diào)(P0.001),且變化趨勢與初步驗證和芯片結(jié)果一致。通過ROC曲線分析,miR-92a-3p和miR-486-5p診斷職業(yè)性汞中毒的曲線下面積(AUC)分別為0.912和0.908;miR-92a-3p和miR-486-5p診斷職業(yè)性汞吸收的AUC分別為0.717和0.721。將約登指數(shù)取最大值的分界點確定為最佳診斷分界點得到靈敏度和特異度,miR-92a-3p診斷慢性汞中毒的靈敏度=0.70,特異度=0.97;miR-92a-3p診斷汞吸收的靈敏度=0.60,特異度=0.77;miR-486-5p診斷慢性汞中毒的靈敏度=0.77,特異度=0.90;miR-486-5p診斷汞吸收的靈敏度=0.57,特異度=0.80。miR-92a-3p和miR-486-5p用于診斷職業(yè)性汞中毒和汞吸收特異度較高而靈敏度較低。結(jié)論:本研究在職業(yè)性汞作業(yè)人群中發(fā)現(xiàn),慢性汞中毒和汞吸收工人血漿miR-92a-3p 和 miR-486-5p 的表達量上調(diào),血漿 miR-92a-3p 和 miR-486-5p 具有作為職業(yè)性汞作業(yè)工人分子標志物的潛質(zhì)。但是miR-92a-3p和miR-486-5p的改變與汞暴露引起的機體損傷之間的因果關(guān)系及其作用機制需要進一步的研究,這兩個miRNA是否為汞暴露明確的生物標志需要更大的人群樣本驗證和實驗研究。
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【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R135

【參考文獻】

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本文編號：1602476