發(fā)布時間：2018-02-14 19:19

  本文關(guān)鍵詞： 腦梗死 血管新生 人參皂苷Rg1 激光散斑 蛋白表達　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:腦血管病對人類健康危害極大,發(fā)病率高,致殘、致死率高,復(fù)發(fā)率高,經(jīng)濟負擔(dān)重,為病人本身及其所在家庭造成極大負面影響。腦梗死是腦血管病中非常常見的一種。新生的血管可以為缺血腦組織提供氧、營養(yǎng)物質(zhì)以及神經(jīng)營養(yǎng)支持,越來越多的證據(jù)表明腦梗死后的血管新生可以緩解病人的癥狀、改善病人的預(yù)后,促進血管新生機制的研究成為了治療缺血性腦梗死研究的新靶點。許多中醫(yī)藥已經(jīng)被證實在缺血性腦血管病中通過不同機制有治療作用。人參皂苷Rg1(Ginsenoside Rg1)是人參皂苷的一種成分,主要存在于人參屬藥材中,可快速緩解疲勞、改善學(xué)習(xí)記憶、延緩衰老,具有興奮中樞神經(jīng)作用、抑制血小板凝集作用,已被證實在心肌梗死、糖尿病肢體梗死、皮膚缺血壞死以及新生兒缺血缺氧性腦病后均存在促進血管新生的作用。并有實驗研究表明人參皂苷Rg1具有在促進血管再生的作用以及增強內(nèi)皮祖細胞血管新生能力的作用。本實驗復(fù)制小鼠大腦中動脈閉塞模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO)應(yīng)用人參皂苷Rg1進行干預(yù),評價人參皂苷Rg1對于腦缺血后血管新生的作用,旨在證實其對于新生血管的促進作用并探討其可能機制。方法:采用健康雄性的成年C57BL/6小鼠,應(yīng)用結(jié)扎右側(cè)頸動脈、顯微鏡下電燒灼大腦中動脈皮層分支制備大腦中動脈閉塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。實驗分組如下:sham組(假手術(shù)組)、MCAO(梗死組)、GRg1-L(低劑量治療組)、GRg1-M(中劑量治療組)、GRg1-H(高劑量治療組)。各組小鼠均在成功造模后即刻給藥,給藥方式為腹腔注射,給藥劑量如下:低劑量治療組(12.5mg/kg),中劑量治療組25mg/kg,高劑量治療組(50mg/kg),連續(xù)給藥14天。并在治療后1天、7天、14天、21天、28天分別觀測記錄Rotarod及m NSS神經(jīng)功能評分,于28天進行HE染色測定腦梗死體積,于3、7、14天進行免疫印跡(western blot)測量VEGF、HIF-1α、VEGFR-2的蛋白表達含量,于造模前、造模后即刻、造模后1、3、7、14天應(yīng)用激光散斑儀觀測腦血流。結(jié)果:1人參皂苷Rg1改善腦缺血小鼠的神經(jīng)功能缺損本實驗對假手術(shù)組、梗死組、低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組分別在腦梗死手術(shù)后1、7、14、21、28天進行了rotarod及m NSS神經(jīng)功能評分,應(yīng)用Prism軟件進行統(tǒng)計。在造模成功后24小時,即梗死后1天,除假手術(shù)組外的各組小鼠均出現(xiàn)了神經(jīng)功能缺損癥狀,即左側(cè)肢體偏癱,且神經(jīng)功能評分升高,各組之間神經(jīng)功能評分未見明顯差異(P0.05)。高劑量治療組與梗死組相比,神經(jīng)功能評分顯著降低,在腦梗死術(shù)后第7天開始有了明顯差異(P0.05),且這一差異一直持續(xù)到腦梗死術(shù)后28天。對于跑輪實驗,從腦梗死術(shù)后第七天開始高劑量人參皂苷Rg1與梗死組出現(xiàn)顯著差異(P0.05),這一差異一直持續(xù)到腦梗死術(shù)后第28天。從腦梗死術(shù)后第7天開始至腦梗死術(shù)后第28天,中劑量治療組、低劑量治療組間或出現(xiàn)與梗死組出現(xiàn)顯著差異的情況,但是中劑量治療組、低劑量治療組與高劑量治療組之間一直存在差異(P0.05),說明人參皂苷Rg1確實有改善腦梗死后小鼠神經(jīng)功能的癥狀,且適宜的治療劑量為高劑量,即50mg/kg。2人參皂苷Rg1未顯著降低小鼠腦梗死體積在術(shù)后第28天,取各組小鼠腦組織并進行HE染色,發(fā)現(xiàn)sham組小鼠的腦組織并未出現(xiàn)梗死灶,其余組小鼠均出現(xiàn)梗死灶,各個劑量治療組與梗死組小鼠比較梗死灶體積減小但并無統(tǒng)計學(xué)意義。(MCAO vs.GRg1-H vs.GRg1-M vs.GRg1-L:11.76%±2.02%vs.9.98%±1.03%vs.10.03%±2.11%vs.10.99%±2.10%,P0.05)。這一結(jié)果提示人參皂苷Rg1不能顯著降低小鼠腦梗死體積。3人參皂苷Rg1改變VEGF、HIF-1α、VEGFR-2蛋白含量的表達本實驗通過免疫印跡法(western blot)測定VEGF、HIF-1α、VEGFR-2三種血管新生相關(guān)蛋白在小鼠腦梗死并用人參皂苷Rg1處理后的相對表達。小鼠接受腦梗死手術(shù)后的第3天、第7天、第14天后(腹腔注射給藥,腦梗死后立即給藥,連續(xù)給藥14天,一天一次,劑量處理如上述實驗)斷頭取腦,按照western blot操作步驟測定VEGF、HIF-1α、VEGFR-2三種蛋白表達含量,利用Image J以及Prism軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計,結(jié)果表明從小鼠腦梗死后第14天開始,各治療組的VEGF、HIF-1α、VEGFR-2蛋白的表達與梗死組相比都有了明顯上調(diào)(P0.05),但是各不同劑量治療組之間的VEGF、HIF-1α、VEGFR-2蛋白表達并沒有出現(xiàn)顯著差異(P0.05),但仍可看出越高劑量的人參皂苷Rg1處理后VEGF、HIF-1α、VEGFR-2蛋白表達含量越高。這一實驗說明人參皂苷Rg1通過上調(diào)血管新生相關(guān)蛋白VEGF、HIF-1α、VEGFR-2來促進血管新生。4人參皂苷Rg1改善腦梗死后血流在造模前、造模后即刻,以及造模后1、3、7、14天用激光散斑儀觀測各組小鼠腦血流。觀察發(fā)現(xiàn):除sham組小鼠外,其他組小鼠在造模成功后腦血流均明顯下降,與造模前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),從造模后第14天開始,高劑量治療組與梗死組相比小鼠腦血流有明顯改善,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。這一結(jié)果說明人參皂苷Rg1可以有效改善腦梗死后小鼠的腦血流,且高劑量(50mg/kg)對腦血流改善效果更為顯著。結(jié)論:腹腔注射人參皂苷Rg1可以改善腦梗死小鼠神經(jīng)功能,人參皂苷Rg1具有腦保護功能,并且可以通過上調(diào)VEGF、HIF-1α、VEGFR-2促進腦梗死后血管新生,并且在腦梗死后恢復(fù)局部血流。由此推斷人參皂苷Rg1通過促進血管新生改善腦梗死預(yù)后,保護缺血性腦組織。
[Abstract]:Objective: cerebrovascular disease of great harm to human health, high incidence, disability, high death rate, high recurrence rate, economic burden, cause great negative impact for patients and their families. The cerebral infarction is itself cerebrovascular disease is a common. New blood vessels can provide oxygen to brain tissue, nutrition material and neurotrophic support, more and more evidence of angiogenesis after cerebral infarction can alleviate the symptoms of patients, improve the prognosis, promote the study of angiogenesis has become a new target for the treatment of ischemic cerebral infarction. Many Chinese medicine has been confirmed in ischemic cerebrovascular disease have therapeutic effects through different mechanisms. Ginseng ginsenoside Rg1 (Ginsenoside Rg1) is a kind of ginsenoside, mainly in Panax species, can quickly relieve fatigue, improve the learning and memory, aging, with excitement The central nervous function, inhibit the platelet aggregation effect, has been confirmed in myocardial infarction, diabetic limb infarction, skin necrosis and neonatal hypoxic ischemic encephalopathy after have role in promoting angiogenesis. And the experiment results show that ginsenoside Rg1 has in promoting the regeneration of blood vessels and enhance endothelial progenitor cells angiogenesis ability. This experiment. Copy artery occlusion in the brains of mice (middle cerebral artery occlusion, MCAO) application of ginsenoside Rg1 intervention, angiogenesis after cerebral ischemia for evaluation of ginsenoside Rg1, which aims to prove the role in promoting angiogenesis and to explore its possible mechanism. Methods: the healthy adult male C57BL/6 mice, application ligation of the right carotid artery under microscope, electric cauterization in the brain cortex branch of middle cerebral artery occlusion (middle cerebral artery o cclusion,MCAO)妯″瀷.瀹為獙鍒嗙粍濡備笅:sham緇，

本文編號：1511419