發(fā)布時(shí)間：2018-01-05 03:17

  本文關(guān)鍵詞：氧化低密度脂蛋白刺激下的巨噬細(xì)胞中YY1和STAT1對(duì)microRNA-29a的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用　出處：《浙江大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 巨噬細(xì)胞 ox-LDL miR-29a YY1 STA

【摘要】：研究背景及目標(biāo):以動(dòng)脈粥樣硬化為病理基礎(chǔ)的冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病及其并發(fā)癥如血栓栓塞,乳頭肌功能失調(diào)和心臟破裂對(duì)全世界人類健康造成了嚴(yán)重的威脅,然而其發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明。在動(dòng)脈粥樣斑塊的形成過(guò)程中涉及多種細(xì)胞的參與,如血管內(nèi)皮細(xì)胞,血管平滑肌細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞等。其中,單核細(xì)胞在血液中可以分化成為巨噬細(xì)胞,而巨噬細(xì)胞在ox-LDL的刺激下可以攝取脂質(zhì),分泌炎性細(xì)胞因子或與其他細(xì)胞相互作用,在多種因素相互作用下最終導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣斑塊的形成。已有大量文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)iRNAs參與包括冠心病在內(nèi)的多種心血管疾病的病理生理過(guò)程,研究結(jié)果表明在miRNAs調(diào)控下單核巨噬細(xì)胞功能的改變也是冠心病發(fā)病過(guò)程中的重要環(huán)節(jié)。MiR-29a參與炎癥免疫,糖代謝及細(xì)胞外基質(zhì)形成等多種生理過(guò)程。近期研究發(fā)現(xiàn)miR-29a可調(diào)控巨噬細(xì)胞內(nèi)與凋亡及蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的基因表達(dá)從而影響腫瘤的發(fā)生。而我們之前研究也發(fā)現(xiàn)在ox-LDL刺激樹(shù)突狀細(xì)胞后,miR-29a不僅表達(dá)增加,還可引起清道夫受體SRA及CD36表達(dá)上調(diào)。然而,miR-29a在ox-LDL刺激后的巨噬細(xì)胞中的效應(yīng)及作用機(jī)制仍未知。故本研究目的主要在于探索miR-29a在ox-LDL刺激下的巨噬細(xì)胞中表達(dá)的變化,及其對(duì)巨噬細(xì)胞功能的影響和相關(guān)作用機(jī)制。研究方法:本實(shí)驗(yàn)采用PMA處理后THP-1細(xì)胞分化成的巨噬細(xì)胞作為開(kāi)展本研究的主要細(xì)胞。經(jīng)過(guò)ox-LDL刺激后,檢測(cè)miR-29a的表達(dá)情況。通過(guò)轉(zhuǎn)染siRNA對(duì)ox-LDL攝取過(guò)程中主要參與因素如清道夫受體SRA,LOX-1和CD36的表達(dá)量改變,觀察miR-29a的表達(dá)情況,以及下調(diào)miR-29a表達(dá)水平后觀察清道夫受體的表達(dá)。其次,通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告檢測(cè)以及轉(zhuǎn)錄因子濾板法測(cè)定等方法確定參與miR-29a表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子。通過(guò)生物信息學(xué)分析,DNA瓊脂糖凝膠電泳,CHIP,細(xì)胞免疫共沉淀等研究轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控miR-29轉(zhuǎn)錄的機(jī)制。此外,我們還通過(guò)過(guò)表達(dá)miR-29a觀察巨噬細(xì)胞分泌的炎性細(xì)胞因子以及脂質(zhì)攝取的情況。結(jié)果:將THP-1成功分化巨噬細(xì)胞后,給予ox-LDL刺激后,觀察發(fā)現(xiàn)miR-29a的表達(dá)上升。抑制SRA和LOX-1,miR-29a的表達(dá)降低,而抑制CD36后miR-29a的表達(dá)水平?jīng)]有明顯變化。miR-29a可以促進(jìn)上調(diào)SRA的表達(dá),而抑制miR-29a后,SRA表達(dá)下降。通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告檢測(cè)以及轉(zhuǎn)錄因子濾板法測(cè)定發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞內(nèi)miR-29a轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游2000bp的區(qū)域在經(jīng)過(guò)ox-LDL刺激后活性增強(qiáng),而YY1和STAT1是與該區(qū)域結(jié)合的主要轉(zhuǎn)錄因子。分別抑制YY1和STAT1后發(fā)現(xiàn)miR-29a表達(dá)下降。生物信息學(xué)分析后發(fā)現(xiàn)miR-29a的啟動(dòng)子區(qū)域僅有YY1的結(jié)合位點(diǎn),而無(wú)STAT1的結(jié)合位點(diǎn),通過(guò)DNA凝膠電泳后證實(shí)YY1可與野生型的miR-29a結(jié)合,而與突變型不能結(jié)合。通過(guò)CHIP發(fā)現(xiàn)ox-LDL刺激后YY1與STAT1與啟動(dòng)子結(jié)合增加,此外YY1和STAT1表達(dá)增加。通過(guò)免疫共沉淀顯示YY1和STAT1可相互結(jié)合并在細(xì)胞核內(nèi)定位增加。抑制JAK1/2激酶后,YY1和STAT1的表達(dá)下降且miR-29表達(dá)也下調(diào)。過(guò)表達(dá)mir-29a不僅引起炎性細(xì)胞因子IL-1β,IL-6和TNF-α的分泌增多,而且促進(jìn)巨噬細(xì)胞脂質(zhì)攝入,而抑制miR-29a后使IL-6和TNF-α的分泌及脂質(zhì)攝取減少。結(jié)論:ox-LDL刺激巨噬細(xì)胞后引起轉(zhuǎn)錄因子YY1及STAT1表達(dá)升高,通過(guò)YY1與STAT1結(jié)合后再與miR-29a的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合,從而促進(jìn)miR-29a的轉(zhuǎn)錄,激活JAK1/2激酶也可與YY1與STAT1協(xié)同誘導(dǎo)miR-29a表達(dá)。此外,我們還發(fā)現(xiàn)mir-29a可正性調(diào)控炎性細(xì)胞因子分泌以及脂質(zhì)攝取增加。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of miR - 29a in the pathogenesis of coronary heart disease ( CHD ) induced by ox - LDL . The results show that miR - 29a can regulate the expression of miR - 29a in the course of the formation of ox - LDL . The results show that miR - 29a can regulate the expression of miR - 29a in the process of ox - LDL stimulation . In order to promote the transcription of miR - 29a , the expression of miR - 29a can also be induced in combination with YY1 and STAT1 . In addition , we find that mir - 29a can regulate inflammatory cytokine secretion and increase lipid intake .

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R541.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 唐慧;伍海姍;楊怡;趙靖平;陳晉東;;外泌體源性microRNA在疾病診療中的研究進(jìn)展[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年11期

，

本文編號(hào)：1381330