發(fā)布時(shí)間：2017-12-25 23:05

  本文關(guān)鍵詞：生半夏及干姜人參半夏方對(duì)小鼠胚胎發(fā)育及mESC分化的影響　出處：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：胎兒期安全用藥對(duì)保證兒童健康生長(zhǎng)發(fā)育有著至關(guān)重要的作用,中醫(yī)藥學(xué)很早就意識(shí)到胎兒期保健的重要意義,并且形成了比較系統(tǒng)實(shí)用的與胎兒期保健相關(guān)的養(yǎng)胎理論和方法,"妊娠禁忌藥"的確立便是其中之一。生半夏作為傳統(tǒng)的"妊娠禁忌藥"在胎兒期的使用一直備受爭(zhēng)論,然醫(yī)圣張仲景所創(chuàng)的"干姜人參半夏丸"作為治療妊娠惡阻的代表方一直被后世沿用至今。干姜人參半夏方在治療孕婦妊娠惡阻時(shí),是否會(huì)因應(yīng)用"妊娠禁忌藥"生半夏而造成"損胎、礙胎",生半夏本身的胚胎毒性如何,其配伍后形成的干姜人參半夏方是否會(huì)通過配伍得到減毒或無(wú)毒,干姜人參半夏湯在胎兒期使用的安全性如何,均有待更加客觀的科學(xué)論據(jù)支持。本實(shí)驗(yàn)研究是國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目--"基于蛋白質(zhì)組學(xué)方法研究半夏對(duì)胚胎發(fā)育的影響及配伍減毒機(jī)制"的一部分實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,通過采用致畸敏感期生殖毒性實(shí)驗(yàn),探索生半夏湯、干姜人參半夏湯對(duì)妊娠小鼠母體及胚胎發(fā)育的影響;同時(shí)通過建立小鼠胚胎干細(xì)胞(mESC)體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?采用生半夏湯(粉)、干姜人參半夏湯(粉)不同的含藥血清進(jìn)行干預(yù)培養(yǎng),研究其對(duì)mESC分化的影響,以期探索生半夏對(duì)胚胎發(fā)育的影響及干姜人參半夏方在胎兒期使用的安全性。目的1.總結(jié)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)、體外實(shí)驗(yàn)在中藥胚胎毒性研究中的應(yīng)用;總結(jié)生半夏、干姜人參半夏方在胚胎毒性研究中的進(jìn)展。2.探索生半夏湯、干姜人參半夏湯對(duì)妊娠小鼠母體及胚胎發(fā)育的影響。3.比較生半夏湯(粉)、干姜人參半夏湯(粉)含藥血清對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞(mESC)分化成心肌細(xì)胞的影響。4.探討生半夏、干姜人參半夏方應(yīng)用于妊娠期治療妊娠惡阻時(shí)對(duì)胎兒的影響及其用藥的安全性。方法1.采取致畸敏感期生殖毒性實(shí)驗(yàn)方法,在張仲景用量的4倍劑量下,比較生半夏湯、干姜人參半夏湯對(duì)妊娠小鼠母體心臟、肝臟、腎臟的影響及對(duì)小鼠妊娠及胚胎發(fā)育的影響,用SPSS19.0軟件進(jìn)行結(jié)果分析。2.采取經(jīng)典的懸滴三步法培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞(mESC),對(duì)形成的擬胚體(EBs)用生半夏湯含藥血清、干姜人參半夏湯含藥血清、生半夏粉含藥血清、干姜人參半夏粉含藥血清、空白組血清、胎牛血清(FBS)六組不同的血清培養(yǎng)14d后,比較其對(duì)mESC分化時(shí)全能性蛋白Cont3及心肌特異性蛋白TnT表達(dá)的影響,用PhotoshopCS5及SPSS19.0軟件進(jìn)行結(jié)果分析。結(jié)果1.以生半夏湯劑量2.275 g·kg-1及干姜人參半夏湯劑量5.688 g·kg-1對(duì)致畸敏感期孕鼠給藥10 d后,母鼠的心、肝、腎臟病理評(píng)分與正常組相比無(wú)顯著差異;生半夏湯組妊娠18 d母體體重與正常組比較明顯降低(P0.05);孕期母體宮外增重、子宮連胎仔重及胎仔指標(biāo)與正常組相比稍低,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。干姜人參半夏湯組的各項(xiàng)指標(biāo)與正常組相比均無(wú)顯著性差異。2.以生半夏湯(粉)、干姜人參半夏湯(粉)含藥血清、空白組血清、FBS培養(yǎng)EBs 14d后,比較各組Cont3蛋白的表達(dá)水平。與FBS組相比,生半夏湯組、生半夏粉組Cont3表達(dá)明顯上調(diào)(P0.01),干姜人參半夏湯組、干姜人參半夏粉組則無(wú)顯著差異;與生半夏湯組相比,干姜人參半夏湯組Cont3表達(dá)稍有下調(diào),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;與生半夏粉組相比,干姜人參半夏粉組Cont3表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05)。3.以生半夏湯(粉)、干姜人參半夏湯(粉)含藥血清、空白組血清、FBS培養(yǎng)EBs 14d后,比較各組TnT蛋白的表達(dá)水平。與FBS組及空白組相比,生半夏湯組TnT表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05),生半夏粉組TnT表達(dá)明顯下調(diào)(P0.01),干姜人參半夏湯組、干姜人參半夏粉組無(wú)顯著差異;與生半夏湯組相比,干姜人參半夏湯組TnT表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05);與生半夏粉組相比,干姜人參半夏粉組TnT表達(dá)明顯上調(diào)(P0.01)。結(jié)論1.在本實(shí)驗(yàn)劑量下,生半夏湯及干姜人參半夏湯無(wú)胚胎毒性,但生半夏湯會(huì)引起孕鼠母體體重的降低。2.生半夏湯(粉)含藥血清可能通過抑制體外mESC向心肌細(xì)胞的分化而產(chǎn)生胚胎毒性,干姜人參半夏湯(粉)含藥血清則對(duì)mESC向心肌細(xì)胞的分化無(wú)顯著影響,推測(cè)在本實(shí)驗(yàn)條件下干姜人參半夏方無(wú)明顯胚胎毒性。3.生半夏作為"妊娠禁忌藥"在胎兒期不建議單獨(dú)使用,干姜人參半夏方未見明顯胚胎毒性,在胎兒期可通過辨證安全使用。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：1334802